JNK信号转导通路在下咽癌FaDu细胞化疗耐药性中的作用机制

发布时间：2020-04-18 22:37

【摘要】：研究目的晚期下咽癌患者治疗后死亡原因可归结为以下几种:1.局部复发;2.远处转移;3.放化疗抵抗。就化疗而言,目前临床上头颈鳞癌经典的化疗方案是TPF方案,包括Taxol,DDP,5-FU等。本课题主要是关于下咽癌化疗耐药机制的研究,其目的主要是:对比检测FaDu、FaDu/T细胞的恶性生物学特性的不同;检测化疗抵抗及抗凋亡相关蛋白在FaDu和FaDu/T细胞系中不同的表达状态;蛋白酶体抑制剂MG-132对下咽癌耐药及抗凋亡等恶性生物学行为的逆转作用;探讨JNK信号转导通路及核转录蛋白NF-κB在MG-132逆转下咽癌FaDu/T细胞多药耐药过程中P-gp表达变化中的作用,进一步揭示下咽癌细胞的化疗抵抗性及其它恶性生物学特性的深层次原因。材料与方法前期工作中我们采用紫杉醇浓度梯度递增法成功建立了 FaDu细胞的耐紫杉醇单克隆细胞系,简称FaDu/T,在此基础上,检测化疗耐药蛋白P-gp及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax及caspase-3不同的表达,通过MTT对比检测两种细胞系半数抑制浓度即IC50,结果发现FaDu/T细胞具有比FaDu细胞更强的多药耐药性;而多药耐药基因ABCB1及相应蛋白P-gp,凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax及caspase-3在两个细胞系中表达变化情况分别通过RT-PCR或者Western blotting检测;蛋白酶体抑制剂MG-132对下咽癌FaDu/T的多药耐药性及抗凋亡特性的抑制、不同时间点JNK信号转导通路相关蛋白的表达变化及NF-κB核转录蛋白活性主要通过MTT、流式细胞术及Western blotting检测手段进行检测。结果1.FaDu/T细胞系成功建立。通过检测发现FaDu/T比FaDu细胞具有更强的恶性生物学特性。2.FaDu/T细胞系中多药耐药相关蛋白P-gp及抗凋亡蛋白Bcl-2与FaDu细胞相比表达明显增加,但Bax及caspase-3等凋亡相关蛋白表达量明显下降。3.蛋白酶体抑制剂MG-132可以明显逆转FaDu/T的多药耐药及抗凋亡等恶性生物学行为。4.FaDu细胞初始加入紫杉醇后我们检测到JNK信号转导通路随时间被逐渐激活,但是在稳定的FaDu/T细胞中JNK信号转导通路呈现部分失活状态,但是和FaDu/T细胞建立过程中核转录蛋白NF-κB核转录活性不断增强。低剂量的蛋白酶体抑制剂MG-132即可使FaDu/T细胞中呈现失活状态的JNK信号通路重新激活,FaDu/T细胞中NF-κB核转录活性则被MG-132明显抑制。5.预先在FaDu/T细胞加入JNK特异性抑制剂SP600125后重新加入MG-132,P-gp的表达未见明显的时间依赖性变化,JNK信号转导通路及核转录蛋白NF-κB共同参与了下咽癌的化疗耐药过程,但对转录调控作用相反。结论1.与FaDu细胞系相比,其耐紫杉醇细胞系FaDu/T细胞具有更强的恶性生物学特性。2.蛋白酶体抑制剂MG-132可以有效的逆转其恶性生物学行为。3.JNK信号转导通路及核转录因子NF-κB共同参与了 MG-132对下咽癌恶性生物学行为的逆转过程。
【图文】：

博士学位论文,山东大学,多药耐药基因,细胞的

图１．表示ＦａＤｕ／Ｔ细胞中多药耐药基因ＡＢＣＢ１及其对应的蛋白Ｐ－ｇｐ表达水逡逑平明显高于ＦａＤｕ细胞

细胞系,统计学意义,表达水平,细胞

图２．与ＦａＤｕ细胞相比ＦａＤｕ／Ｔ细胞系中Ｂｃｌ－２／邋Ｂａｘ的蛋白表Ｃａｓｐａｓｅ－３表达水平明显降低，差异有统计学意义（＊邋ｐ邋＜邋０．０５）逡逑Ａ逦．．，；，，：；，．逦．逡逑ｐ－ｇｐ逦“ 擺．．逡逑Ｂｃｉ－２逡逑Ｃａｐａｓｅ－３邋’＇逦”逡逑Ａｃ邋ｔｉｎ逡逑ＦａＯｕ／Ｘ邋ＦａＤｕｒｒ邋＾邋ＭＯ邋Ｉ邋３２逡逑Ｂｉ＾逦了ｓ￣］逦ｎ逡逑，Ｓ邋６０Ｃｈ逦０邋ｃ？ｒｔｆＭｒｔｅ－ｓ邋１逡逑爸５0４逦Ｉ邋Ｑ邋Ｂａｘ邋ｊ逦」…逡逑ｆｅ－邋４０＜ｉ逡逑Ｍ邋３００－逡逑－ｇ邋２0ｑ－逦义：逡逑＾逦…．．逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.63

【参考文献】