IL-36γ在慢性鼻—鼻窦炎中性粒细胞性炎症中的活化及作用

发布时间：2020-06-08 16:28

【摘要】：背景中性粒细胞性炎症反应在慢性鼻-鼻窦炎中得到越来越广泛的重视,然而中性粒细胞在慢性鼻-鼻窦炎中的功能和调控仍没有得到完全揭示。IL-36家族成员在中性粒细胞性炎症反应中可能起着重要的作用。目的研究IL-36家族成员在慢性鼻-鼻窦炎中的表达和作用。方法慢性鼻-鼻窦炎患者作为实验组,鼻中隔偏曲患者作为对照组。采用RT-PCR 方法检测组织中 IL-36α、IL-36γ、IL-36γ、IL-36Ra、IL-38 和 IL-36R 的 mRNA表达水平;利用免疫组织化学方法检测上述指标的组织学分布和表达量,并进一步以ELISA方法加以验证。采用免疫荧光技术及流式细胞学技术测定IL-36R的表达情况。分离并纯化外周血中的中性粒细胞进行培养。培养鼻息肉粘膜原代上皮细胞,用相关细胞因子进行刺激,并检测目的基因的表达情况。采用Western blotting技术检测全长型IL-36γ的表达水平及裂解。培养游离鼻息肉组织细胞(Dispersed nasal polyp cell,DNPCs)并分别予以全长型IL-36γ(伴或不伴弹性蛋白酶)及地塞米松进行刺激。结果中性粒细胞浸润程度、IL-36家族成员及IL-36R表达水平在伴有或不伴有鼻息肉的鼻窦炎组织中均较对照组明显上调。IL-36γ是表达量最高的IL-36家族成员,其主要表达部位为鼻窦炎组织上皮细胞。中性粒细胞是鼻窦炎组织中表达IL-36R的最主要细胞。外周血中性粒细胞几乎不表达IL-36,但其在IL-6、IL-1β和Dermatophagoides pteronyssinus group 1(Der p1)的作用下可上调 IL-36R的表达水平。在鼻息肉组织中,弹性蛋白酶的活性增强并可裂解全长型IL-36γ。与此一致地,裂解型IL-36γ在鼻息肉组织中较对照组显著增多。采用全长型IL-36γ刺激 DNPCs,可以促进 MMP-9、IL-17A、CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的产生,加入弹性蛋白酶抑制剂后可以抑制上述产物的表达,然而,加入地塞米松不能抑制上述的IL-36γ的促炎作用。结论本文首次全面研究了 IL-36家族在慢性鼻-鼻窦炎中的表达情况,对IL-36a、β、γ、IL-36Ra和IL-38在慢性鼻-鼻窦炎中的表达水平以及组织学定位获得了明确的结果。发现IL-36γ在CRS中具有最高的表达量。并首次寻找到IL-36受体(IL-36R)在CRS中的表达和定位,发现主要表达IL-36R的细胞是中性粒细胞。本研究首次揭示了 IL-36γ在慢性鼻-鼻窦炎中的功能,并进一步证实了全长IL-36γ的功能在中性粒细胞来源酶的活化后得到显著增强,活化后的IL-36γ直接作用于中性粒细胞表面的IL-36R而发挥功能。本研究初步揭示了地塞米松不能抑制活化的IL-36γ所导致的鼻息肉组织中性粒细胞炎症反应,从而提示了IL-36γ的作用可能是部分慢性鼻-鼻窦炎患者激素治疗效果不佳的原因。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R765

【参考文献】