双醋瑞因滴眼液的小鼠角膜药代动力学及药效学研究

发布时间：2020-10-23 22:26

　　 第一部分双醋瑞因滴眼液多次给药的小鼠角膜药代动力学研究目的研究双醋瑞因滴眼液多次给药与单次给药的角膜药代动力学差异。方法以2%双醋瑞因为实验滴眼液,选取健康无眼疾的雄性昆明白小鼠,随机分为多次给药组和单次给药组,双眼结膜囊分别给予双醋瑞因滴眼液。多次给药组间隔2 min给药一次,共给药3次;单次给药组仅给药1次。用高效液相法测定角膜中双醋瑞因的代谢产物(大黄酸)的浓度,多次给药组和单次给药组的时间点均为5min、15min、30min、60min、120min、180min。将小鼠角膜组织中的药物浓度经药物动力学程序(DAS2.1.1)进行拟合,并计算相关药动学参数。结果结膜囊多次给药组和单次给药组各个时间点角膜中均可检测到其活性代谢产物大黄酸;多次给药组和单次给药组在5min的浓度分别为(318.678±40.88)μg/g和(145.17±19.29)μg/g。两组角膜中大黄酸的含量均于给药后5min最高,多次给药组浓度高于单次给药组浓度(P0.01)。随时间延长大黄酸的浓度逐渐下降,3 h后多次给药组浓度仍高于单次给药组(P0.01)。多次给药组半衰期为(1.48±0.33)h,单次给药组半衰期为(0.89±0.31)h。结论结膜囊多次给药与单次给药相比具有药物有效浓度高、维持时间长的优点。第二部分双醋瑞因滴眼液减轻真菌性角膜炎炎症反应及组织破坏作用机理的研究目的研究双醋瑞因滴眼液减轻真菌性角膜炎炎症及组织破坏的作用及机理,以期为真菌性角膜炎的治疗提供新的依据。方法雄性C57BL/6J小鼠45只,SPF级,周龄8-12周。实验分为单纯模型组、那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组,每组30只眼(n=30)。应用裂隙灯显微镜分别在造模成功后18 h、36 h、48h、72h、96h、120h、144h、168h对小鼠眼表进行观察拍照并对角膜病变程度进行临床评分。处死小鼠后,取角膜组织进行角膜整铺片免疫荧光染色,分别用FITC anti-mouse Ly-6G、钙荧光白(Calcofluor White,CFW)标记中性粒细胞和真菌菌丝。应用双光子激光扫描显微镜对角膜缘、旁中央及中央角膜进行Z轴扫描,测定每个角膜内中性粒细胞体积和真菌负荷量。使用酶联免疫吸附剂法(ELISA)对小鼠角膜内的IL-1、IL-6、ICAM-1、MIP-2、MMP-8、MMP-9、MMP-13的含量进行测定,并对MMPs的活性进行测定。结果1从各组小鼠角膜临床评分来看,那他霉素组36h、72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜临床评分较单纯模型组显著降低(均为P0.05);那他霉素+双醋瑞因组36h、48h、72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜临床评分较单纯模型组显著降低(均为P0.05),72h、96h、120h、144h、168h小鼠角膜临床评分较那他霉素组显著降低(均为P0.05)。单纯模型组、那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组的小鼠角膜穿孔率分别为60%、40%、20%。那他霉素+双醋瑞因组的小鼠角膜穿孔率与单纯模型组相比,差异显著(χ~2=8.403 P=0.004)。2在用药后小鼠角膜真菌负荷量明显减少,那他霉素组在36h小鼠角膜真菌负荷量明显低于单纯模型组(P0.05);双醋瑞因组在48h小鼠角膜真菌负荷量明显低于单纯模型组(P0.05)。48h和72h那他霉素组小鼠角膜中性粒细胞体积少于单纯模型组(P0.05);48h、72h和120h那他霉素+双醋瑞因组小鼠角膜中性粒细胞体积少于单纯模型组(P0.05);72h那他霉素+双醋瑞因组小鼠角膜中性粒细胞体积少于那他霉素组(P0.05)。3给予双醋瑞因滴眼液后IL-1和IL-6的表达明显下降,48h和72h那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组IL-1的表达较单纯模型组显著下降(P0.05);72h那他霉素+双醋瑞因组IL-1的表达较那他霉素组显著下降(P0.05);120h那他霉素+双醋瑞因组IL-1的表达较单纯模型组显著下降(P0.05)。在使用那他霉素和双醋瑞因60h后,IL-6在真菌性角膜炎小鼠模型中的表达降低,其中那他霉素+双醋瑞因组低于那他霉素组(P0.05)。4给予双醋瑞因滴眼液后MIP-2和ICAM-1的表达明显下降,72h那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组MIP-2的表达较单纯模型组显著下降(P0.05);120h那他霉素+双醋瑞因组MIP-2的表达较单纯模型组显著下降(P0.05)。72h那他霉素组ICAM-1的表达明显低于单纯模型组(P0.05);那他霉素+双醋瑞因组ICAM-1的表达明显低于单纯模型组和那他霉素组(P0.05)。5给予双醋瑞因滴眼液后MMPs的表达和活性也得到有效控制,那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组的MMP-8表达在48h和72h较单纯模型组显著降低(P0.05);那他霉素+双醋瑞因组MMP-8的表达在48h较那他霉素组显著降低(P0.05)。那他霉素+双醋瑞因组MMP-9的表达在48h和96h较单纯模型组显著降低(P0.05)。那他霉素+双醋瑞因组MMP-13的表达在120h较单纯模型组显著降低(P0.05)。那他霉素组和那他霉素+双醋瑞因组MMPs的活性在48h、72h和120h较单纯模型组显著降低(P0.05);那他霉素+双醋瑞因组MMPs的活性在48h和72h较那他霉素组显著降低(P0.05)。结论双醋瑞因滴眼液在真菌角膜炎中可以减少IL-1和IL-6的分泌,通过抑制MIP-2和ICAM-1的表达,减少中性粒细胞的浸润,从而抑制MMPs表达及其活性,减少胶原的降解,减轻真菌性角膜炎炎症反应对角膜造成的损伤。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R77
【部分图文】：

据处理PSS21.0 及 Microsoft Excel2010 软件分析，实验结果采用均数标准曲线采用简单线性回归分析；采用独立样本 t 检验对各时异比较，P< 0.05 表示差异具有统计学意义；两组的不同时间差素方差分析，若方差齐则采用 LSD 检验，若方差不齐则采用 ，P< 0.05 表示差异具有统计学意义。药动学参数分析采用 DA件。醋瑞因给药后在角膜中转化为大黄酸

表 1 2%双醋瑞因滴眼液多次与单次给药的角膜内药物浓度（n=6）时间多次给药μg/g单次给药μg/g5 min 318.67 ± 40.88** 145.17±19.2915 min 210.02 ± 25.66**##97.95 ± 10.49#30 min 188.83 ± 31.74**##71.18 ± 18.70##60 min 112.24 ± 11.70**##39.11 ± 2.44##120 min 90.28 ± 22.01**##18.10 ± 2.34##180 min 57.67 ± 13.71**##9.08 ± 2.04##与单次滴眼相比，**P< 0.01，与 5min 相比，#P< 0.05，##P< 0.01

图 1 不同时间点各组小鼠眼球裂隙灯下的大体表现，单纯模型组 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（A-G），那他霉素组 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（H-N），那他霉素+双醋瑞因组 18h、36h、48h、72h、96h、120h、168h（O-U）
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本文编号：2853623