MDM4基因多态性与口咽鳞癌中HPV状态及复发风险的相关性研究

发布时间：2020-11-10 03:04

　　 背景与目的:口咽鳞癌的发病率明显上升,主要是人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染导致的。HPV E6蛋白可结合并降解p53,从而导致了口咽癌。与HPV阴性口咽癌相比,HPV阳性的口咽癌具有独特的流行病学、分子生物学特点和更好的预后。肿瘤复发是口咽癌预后不良和死亡的主要原因。研究表明单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)可作为可靠的预后分子标志物,然而目前仍缺乏与口咽癌复发相关的特征性SNP。鼠双微体4(MDM4)是p53通路中的重要癌蛋白,在许多肿瘤的发生发展中发挥了重要作用。由于MDM4和HPV E6蛋白均作用于p53,我们对MDM4的三个功能SNP变异与口咽癌中HPV状态以及肿瘤复发之间的相关性进行研究,旨在探讨MDM4的SNP是否可用作预测口咽癌中HPV状态以及肿瘤复发的生物标志物。材料与方法·:1.收集在美国德克萨斯州大学(U.T.)MD.安德森癌症中心就诊的552例口咽癌患者的年龄、性别、种族、吸烟、饮酒状况等资料。提取其石蜡包埋肿瘤组织DNA,采用PCR技术明确肿瘤HPV状态。2.使用HapMap SNP公共数据库选择三个标记MDM4 SNPs:rs11801299GA、rs10900598GT和rs1380576CG。从血标本中提取DNA,使用ABI TaqMan genotyping基因分析平台对MDM4 SNPs进行基因分型。MDM4 SNPs与HPV状态的相关性采用logistic回归分析,并进一步分层分析。3.对1008例患者进行随访,主要终点事件是肿瘤复发。提取血标本中的DNA,对三个MDM4 SNPs进行基因分型。采用单因素和多元Cox回归对单个/三个MDM4基因变异组合与复发状况进行相关性分析。4.进一步对HPV阳性口咽癌患者的复发情况与MDM4 SNPs分别或组合后的高/低风险组的相关性进行分析。5.构建质粒、转染、荧光素酶实验检测MDM4rs11801299 A/G和MDM4rs10900598 T/G基因型的HPV阳性和HPV阴性细胞株中MDM4表达水平的差异。结果:1.在552例可明确HPV状态的口咽癌患者中,HPV阳性占多数。HPV阳性患者更常见于男性和非吸烟者。2.单个/三个MDM4基因变异组合均与口咽癌的HPV状态显著相关,多元回归分析中差异仍显著,而且在年轻、非吸烟者和不饮酒患者中相关性更显著。3.1008例口咽鳞癌患者中共181例肿瘤复发,总的精算复发率约20%。年龄、种族、吸烟或饮酒、合并症、治疗方式均与无瘤生存期显著相关。单因素和多元Cox回归分析发现单个/三个MDM4基因变异组合均与肿瘤复发风险显著相关。4.324例HPV阳性口咽癌患者中45例肿瘤复发,MDM4基因变异与复发风险显著相关,而且比全部口咽癌的分析结果更为明显。5.当MDM4 3'UTR荧光素酶报告质粒共转染到HPV阳性的UMSCC47细胞系或HPV阴性的UMSCC4细胞系后,携带rs11801299不同等位基因的细胞中的荧光素酶活性水平存在显著差异,而携带rs10900598不同等位基因的细胞中的荧光素酶活性水平则呈临界的显著差异。结论:1.口咽癌患者中HPV阳性者占大多数。2.MDM4 SNPs可能成为预测口咽癌中HPV状态的分子标记物,特别是在非西班牙裔白人、从不吸烟者和从不饮酒者中。3.三个MDM4SNPs可单独、或联合地作为口咽癌复发的独立危险因素。4.在HPV阳性患者中,MDM4SNPs与口咽癌复发风险的相关性更为明显。5.MDM4中的SNP变异可能通过改变MDM4的表达水平从而影响了 口咽癌的复发风险。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.63
【部分图文】：

将报告荧光基团切割下来，避免了３’端淬灭荧光基团的淬灭作用，从而发出荧光。??两个探针的５’端标有不同的荧光（ＶＩＣ或ＦＡＭ），３’端标有ＭＧＢ淬灭基团结合??体。根据检测到的不同荧光，可以判断相应样本的ＳＮＰ等位基因型（见图２－１）。??３４??

图２－２?ＴａｑＭａｎ探针法ＳＮＰ基因分型软件分析示意图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｘａｍｐｌｅ?ｏｆ?ａｎ?ａｌｌｅｌｉｃ?ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ?ｐｌｏｔ??１．４统计分析??使用卡方检验检测ＨＰＶ１６阳性和ＨＰＶ?１６阴性患者的人口学特征、吸烟和酒状况以及ＭＤＭ４基因型之间的差异。通过计算比值比（ＯＲ）和９５％置信区（ＣＩ），使用单变量和多变量ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析来估计口咽癌中ＭＤＭ４基因型和瘤ＨＰＶ１６阳性之间的关联。在多因素Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型中，按年龄，性别，种吸烟和饮酒状况分为基因型进一步分组。使用统计分析系统软件（版本９．３；?ＳＡＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，?Ｃａｒｙ，?ＮＣ）进行所有的统计分析。所有的检验都是双侧的，０．０５的Ｐ值被认为是显著的。??

２．５?ＭＤＭ４多态性的基因型与肿瘤复发风险之间的相关性??我们采用Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法分析，发现ＭＤＭ４－ｒｓｌ０９００５９８?ＧＴ／ＴＴ基因型患者??的无瘤生存期显著低于ＧＧ基因型（ｌｏｇ－ｒａｎｋ，?Ｐ?＝?０．０００２）（见图３－１）。??ＭＤＭ４－ｒｓｌｌ８０１２９９?ＧＧ基因型患者的无瘤生存期显著低于ＡＧ?／?ＡＡ基因型??（ｌｏｇ－ｒａｎｋ，?Ｐ＜０．００１）。（见图３－２）??￣?ＧＧ?????ｔｌ?０．７５?＇？一？？？？一＇？？？??????｜?ＧＴ／ＴＴ??｜??｜?〇５〇??Ｌｏｇ－ｒａｎｋ：?ｐ＝０．０００２??｜?０，２５：??０：００＾??????????＇???〇?２５?５０?７５?１００?１２５?１５０?１７５??Ｔｉｍｅ?（ｍｏｎｔｈｓ）??
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本文编号：2877376