TIGAR对鼻咽癌细胞自噬、凋亡及线粒体降解作用研究
发布时间:2020-12-19 20:34
目的:探讨TIGAR(TP53‐induced glycolysis and apoptosis regulator)基因沉默后对鼻咽癌5-8F细胞自噬、凋亡、线粒体降解及线粒体形态、功能的影响。方法:1、体外培养鼻咽癌5-8F细胞系;通过慢病毒介导的特异性shRNA干扰TIGAR表达,并通过免疫荧光分析、Western blot检测TIGAR在胞质及线粒体内表达水平变化;2、流式细胞仪分析沉默TIGAR基因后细胞内代谢产物还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)及活性氧(ROS)含量变化,评估细胞内氧化应激水平;3、Western blot检测主要的细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin-1及P62表达水平变化,分析细胞自噬活性变化;4、JC-1染色细胞检测线粒体膜电位变化;5、分离细胞质蛋白及线粒体蛋白通过Western blot检测凋亡蛋白细胞色素c在线粒体与胞质内表达水平变化;流式分析检测Annexin V/PI染色细胞凋亡率;6、Western blot检测线粒体自噬蛋白PINK1及Parkin表达水平变化;线粒体绿色荧光探针标记线粒体,通过流式分析线粒体数量变化,...
【文章来源】:西南医科大学四川省
【文章页数】:60 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
A.TIGAR在5-8F细胞线粒体内表达变化(SP×400);mtHSP70标记线粒体
既往研究证明 TIGAR 沉默表达后磷酸戊糖途径 NADPH 产内氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH使过多的活性氧(ROS)堆积,使细胞不能维持正常的氧化应激增加。ROS 可参与多种细胞信号转导,调节细胞自亡,近年来多项研究表明,ROS 还参与 TIGAR 对肿瘤细等相关途径的调控。因此我们通过流式分析及酶标仪分别R 干扰后 5-8F 细胞内活性氧、谷胱甘肽含量变化,发现 TIG5-8F 细胞内 GSSG 比例升高(P=0.005, 图 2B),ROS 水平0.021, 图 2A)。扰 TIGAR 后 5-8F 细胞内氧化还原状态改变
LC3-II 蛋白与聚泛素化蛋白形成复合物,通过这种泛素信号途径转运聚的蛋白质、损伤的胞器最终在溶酶体内降解,在自噬的过程中,P62 也断被消耗[29],因此这三个蛋白被用来作为检测自噬水平的关键指标。研究通过 Western blot 分析检测 5-8F 细胞自噬标志分子 Beclin1、LC3P62 蛋白表达情况,结果显示相对于 sh-Scramble 细胞,sh-TIGAR 细Beclin1、LC3-II/LC3-I 表达显著上升,同时 P62 表达下降(图 3),说沉默 TIGAR 后,5-8F 细胞自噬增强。
【参考文献】:
期刊论文
[1]多功能蛋白p62调节细胞自噬及相关疾病的研究进展[J]. 刘丹,关秀茹. 国际免疫学杂志. 2014 (06)
[2]细胞自噬及其与肿瘤关系的研究进展[J]. 石峰,王明荣. 中国细胞生物学学报. 2011(12)
[3]细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展[J]. 李娜,高俊岩,刘敏. 当代医学. 2009(16)
[4]细胞凋亡的最新研究进展[J]. 张晓晖,姚天明,黄高昇,王文亮. 第四军医大学学报. 2002(S1)
[5]Bcl-2家族蛋白与细胞凋亡[J]. 付永锋,樊廷俊. 生物化学与生物物理学报. 2002(04)
本文编号:2926532
【文章来源】:西南医科大学四川省
【文章页数】:60 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
A.TIGAR在5-8F细胞线粒体内表达变化(SP×400);mtHSP70标记线粒体
既往研究证明 TIGAR 沉默表达后磷酸戊糖途径 NADPH 产内氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH使过多的活性氧(ROS)堆积,使细胞不能维持正常的氧化应激增加。ROS 可参与多种细胞信号转导,调节细胞自亡,近年来多项研究表明,ROS 还参与 TIGAR 对肿瘤细等相关途径的调控。因此我们通过流式分析及酶标仪分别R 干扰后 5-8F 细胞内活性氧、谷胱甘肽含量变化,发现 TIG5-8F 细胞内 GSSG 比例升高(P=0.005, 图 2B),ROS 水平0.021, 图 2A)。扰 TIGAR 后 5-8F 细胞内氧化还原状态改变
LC3-II 蛋白与聚泛素化蛋白形成复合物,通过这种泛素信号途径转运聚的蛋白质、损伤的胞器最终在溶酶体内降解,在自噬的过程中,P62 也断被消耗[29],因此这三个蛋白被用来作为检测自噬水平的关键指标。研究通过 Western blot 分析检测 5-8F 细胞自噬标志分子 Beclin1、LC3P62 蛋白表达情况,结果显示相对于 sh-Scramble 细胞,sh-TIGAR 细Beclin1、LC3-II/LC3-I 表达显著上升,同时 P62 表达下降(图 3),说沉默 TIGAR 后,5-8F 细胞自噬增强。
【参考文献】:
期刊论文
[1]多功能蛋白p62调节细胞自噬及相关疾病的研究进展[J]. 刘丹,关秀茹. 国际免疫学杂志. 2014 (06)
[2]细胞自噬及其与肿瘤关系的研究进展[J]. 石峰,王明荣. 中国细胞生物学学报. 2011(12)
[3]细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展[J]. 李娜,高俊岩,刘敏. 当代医学. 2009(16)
[4]细胞凋亡的最新研究进展[J]. 张晓晖,姚天明,黄高昇,王文亮. 第四军医大学学报. 2002(S1)
[5]Bcl-2家族蛋白与细胞凋亡[J]. 付永锋,樊廷俊. 生物化学与生物物理学报. 2002(04)
本文编号:2926532
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/2926532.html
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