1-磷酸鞘氨醇微泡改善慢性间歇低氧致内皮细胞损伤的机制研究

发布时间：2020-12-27 13:17

　　第一部分慢性间歇低氧内皮细胞损伤模型构建与评估目的:构建并评估慢性间歇低氧内皮细胞损伤模型。方法:设计并制备慢性间歇低氧细胞培养箱,分别与物理持续性低氧内皮细胞模型及氯化钴干预低氧内皮细胞模型进行比较。设置慢性间歇低氧细胞培养箱条件:1%O2浓度维持35分钟,21%O2浓度维持25分钟,至此1小时为一个循环;设置物理持续性低氧内皮细胞模型条件:始终维持1%O2浓度;设置氯化钴干预低氧内皮细胞模型条件:Co Cl2以100μmol/L加入细胞培养中。建模同步持续时间以慢性间歇低氧细胞模型构建72个循环为标准。分别运用Western blot技术检测三组低氧内皮细胞中Bcl2、Bax及Cyt C指标变化。针对慢性间歇低氧内皮细胞模型运用DCFH-DA荧光探针检测低氧内皮细胞内活性氧水平,运用TUNEL染色检测低氧内皮细胞凋亡情况。结果:成功设计并制备慢性间歇低氧细胞培养箱,Western Blot结果显示,以我们设计的低氧细胞培养箱为建模设备,调整参数为始终维持1%O2浓度情况下,与Co Cl2干预低氧模型相比,Bax、Cyt C趋势上稍有升高,但无统计学意义。而慢性间歇低氧模型组与对照组... 

【文章来源】：东南大学江苏省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

CIH细胞培养箱及控制面板

东南大学博士学位论文IH 组细胞 ROS 水平升高，细胞凋亡在确认 CIH 细胞培养箱可以导致 HUVEC 细胞损伤相关指标变化后，针对组细胞进行 ROS 和 TUNEL 染色，分别在荧光显微镜及光镜显微镜下进行，并与 NC 组进行比较发现，CIH 组细胞内 ROS 水平升高，细胞出现凋亡 3）。

配置不同浓度的 S1P，并利用不同浓度 S1P 对 CIH 模型进行预处理，提白，与 NC 组和 CIH 组相比，加用 S1P 后，四组细胞蛋白 Bcl2 水平较 CIH高，Bax 和 Cyt C 均降低。10nM 组与 CIH 组相比，Bcl2 有所升高（0.43±0. 0.24±0.05, P<0.05; 图 1），Bax 蛋白水平降低（0.65±0.07 vs. 0.76±0.08, P<0 1），但与 NC 组相比仍有较大差距。而 100nM 组在经过 100nM S1P 预处理后历 72h CIH 干预，细胞内 Bcl2 水平高于 CIH 组和 10nM 组（0.75±0.0924±0.05, 0.75±0.09 vs. 0.43±0.06, *, #P<0.05; 图 1），Bax 水平低于 CIH 组nM 组（0.31±0.08 vs. 0.76±0.08, 0.31±0.08 vs. 0.65±0.07, *, #P<0.05; 图 1）， NC 组相比，Bcl2 和 Bax、Cyt C 蛋白的表达水平无明显差异。500nM 组和 1 Bcl2 水平虽较 100nM 组有所升高，但无统计学差异（P>0.05），在 Bax 和 的蛋白水平表达上也有相似的趋势而无统计学意义。NC 组、100nM 组、500、1μM 组，四组组间均无明显统计学差异。


本文编号：2941802