增殖期糖尿病视网膜病变小鼠晶体摘除术后经JNK/cjun、stat1通路及小胶质细胞M1极化引起视网膜炎症及免疫反应

发布时间：2020-12-30 01:36

　　背景与目的:研究晶状体摘除术后糖尿病性视网膜病变小鼠视网膜炎性细胞因子的变化情况以及相关炎症反应对于糖尿病性视网膜病变进展的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为正常、非增殖性糖尿病视网膜病变（NPDR）和增殖性糖尿病视网膜病变（PDR）组。NPDR和PDR由链脲佐菌素诱导。在正常（n=46）,NPDR（n=46）和PDR组（n=46）的C57BL/6小鼠单侧眼进行囊外晶体摘除术（ECLE）,将对侧未做手术眼（n=72）作为自身对照,将未做手术小鼠的眼睛（n=138）作为空白对照。收集术后1天、2天和7天的视网膜神经上皮层,通过RT-PCR定量检测各组视网膜神经上皮层中参与急性炎症/损伤应答的基因表达水平变化（包括白介素IL-1β,趋化因子MCP-1,成纤维细胞生长因子FGF,转化生长因子TGF-β等）,基于以上实验结果,对关键的炎症因子进行蛋白质印迹以及免疫组化水平的检测。同时用视网膜铺片观察小胶质细胞活化的状态,并用伊文思蓝检测血视网膜屏障破坏（BRB）的情况及相关紧密连接蛋白表达的变化。为了研究在本实验模型中炎症因子是由视网膜何种细胞分泌而来,将升高最为显著的MCP-1与小胶质... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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图３．１?ＳＴＺ注射后不用时期小鼠血糖浓度的变化情况

３．１．１糖尿病小鼠的血糖和体重??首先，通过剪尾采血法测量小鼠血糖浓度以及体重来评估ＳＴＺ注射后小鼠的??状态，如图３．１？３．２所示。小鼠血糖浓度于１周后显著高于正常组，差异具有统??计学意义（／？＜〇．〇５），稳定高于１６．５?ｍｍｏｌ／Ｌ的小鼠视为造模成功。正常小鼠的??体重持续增长于３个月后稳定与３０?ｇ左右。而造模成功后的ＤＲ小鼠，体重于２??周后显著低于正常小鼠，差异具有统计学意义（尸＜０．０５）。其体重稳定与２０ｇ左??右，随着ＤＲ进展以及年龄的老化，体重在５个月时略有降低。??＿?４〇．??｜?Ｎｏｒｍａ！??ｔ：?ｉＨ一￣１—？＾Ｄ－ｓ??Ｖ＇ｂＨ?１?ｉ??ｍ?０．１?????０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?１４０?１６０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙｓ）??图３．１?ＳＴＺ注射后不用时期小鼠血糖浓度的变化情况。黑点为正常组（注射??等量的生理盐水）。白圈为糖尿病组。??４０－，??Ｎｏｒｍａｌ??ｃ：?Ｄｉａｂｅｔｅｓ??￣５??ｂ?＾??１０－Ｕ——？￣．――．￣．——ｉ——ｐ——．—．??０?２０?４０?６０?８０?１００?１２０?１４０?１６０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙｓ）??图３．２?ＳＴＺ注射后不同时期小鼠体重的变化情况。黑点为正常组（注射等量??的生理盐水）。白圈为糖尿病组。??１６??

观察高血糖持续２月余的糖尿病小鼠眼底血管的形态，眼底微血管瘤是视网膜病??变的主要特征之一，凭此可以判断ＤＲ小鼠模型是否构建成功。眼底出现微血管??瘤如图３．３右图的小鼠提示造模ＤＲ小鼠成功，被纳入ＮＰＤＲ组，并继续监测血糖??至少５月余，血糖持续高者纳入ＰＤＲ组。??Ｎｏｒｍａｌ?ＮＰＯＨ??图３．３?ＤＲ小鼠眼底微血管状态??３．１．３糖尿病小鼠视网膜的基础炎症因子水平??为了检测视网膜内炎症因子的变化，我们分别提取ＮＰＤＲ、ＰＤＲ组小鼠的视??网膜神经上皮层，应用实时荧光定量ＰＣＲ进行ｍＲＮＡ的检测，并用年龄匹配的非??糖尿病小鼠作为对照组。结果发现：ＮＤＰＲ组中ＩＬ－６和ＭＣＰ－１的表达水平显著高??１７??


本文编号：2946720