米诺环素对大鼠视神经损伤视网膜神经节细胞和小胶质细胞表达的影响

发布时间：2017-05-14 01:00

  本文关键词：米诺环素对大鼠视神经损伤视网膜神经节细胞和小胶质细胞表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：视神经损伤，临床疗效差，其再生和功能恢复一直是眼科临床及科研亟待解决的难题。目前研究主要集中在其损伤后早期药物运用，尽管抗氧化剂、神经节苷脂等对恢复视功能有一定作用，但药物副作用、疗效欠佳等因素限制了其广泛应用。使得关于视神经损伤保护的研究进展缓慢。米诺环素（minocycline）为第二代半合成四环素衍生物，现在以较强的抗菌作用广泛应用于临床。近年来多项研究显示，，米诺环素除具有抗炎、免疫抑制作用外，在多种神经疾病模型中显示出一定神经元保护作用[1]。但米诺环素对视神经损伤再生的作用尚不清楚，相关研究报道罕见。 本研究通过建立大鼠视神经损伤模型，应用米诺环素进行干预，观察米诺环素对视神经损伤后视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells，RGCs）的保护作用及对视网膜小胶质细胞（表面标记物为CD11b）、肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响，探讨米诺环素对大鼠视神经损伤再生的作用及可能存在的保护机制，以求在促进视神经损伤后再生方面寻找新的治疗药物，拓宽米诺环素在临床的应用。为临床应用提供实验依据。 方法：雄性清洁级SD大鼠60只，体重（200±20）g，行外眼、眼底检查无病变者纳入实验。随机分为正常对照组（正常组）12只（24眼）、实验对照组（对照组）24只（24眼）、实验治疗组（治疗组）24只（24眼）。后两组建立视神经损伤模型，从造模后1小时开始，每日一次，对照组给予生理盐水45mg/kg腹腔注射，治疗组给予米诺环素45mg/kg腹腔注射。在伤后1天、4天、7天、14天四个时间点分别取材，正常组3只大鼠双眼眼球、后两组6只大鼠右眼眼球摘除，取视网膜组织固定切片，以视盘上方2mm的视网膜作为观察对象。HE染色，光学显微镜观察视网膜形态学改变，同时计数RGCs存活数量，免疫组化染色观察CD11b及TNF-α的表达情况，计算机图像分析行半定量检测平均光密度值（average optical density，AOD），以免疫阳性染色的AOD表示抗原表达量，AOD值越高阳性表达越强。统计结果用均数±标准差来表示，实验数据利用SPSS13.0软件包，进行统计学分析。同一组内的不同时间点的数据运用单因素方差分析（ANOVA），不同组间的同一时间点数据运用配对t检验。P＜0.05差异有统计学意义，P＜0.01差异有显著统计学意义。 结果： 1视网膜组织HE染色、光镜结果 1.1形态学改变 正常组：视网膜神经节各细胞层、内核层及外核层的细胞排列致密，结构清晰，边界清楚；对照组：各时间点RGCs数目迅速的减少，在损伤早期，部分细胞可出现水肿及空泡样变化，随着损伤时间延长，大鼠视网膜神经节细胞层的胞核明显变稀疏、变薄且排列紊乱，内核层和外核层也不同程度的减少；治疗组亦可见上述改变，但其各时间点均较对照组的各时间点损伤轻，各时间点大鼠视网膜细胞核排列可，尚整齐，稀疏程度及空泡样改变均较对照组轻。 1.2RGCs数量改变 正常组平均RGCs数无明显差异；对照组1、4、7、14天平均RGCs数为22.543±1.559、13.971±1.150、9.971±1.175、5.800±1.106个；治疗组1、4、7、14天平均RGCs数为24.771±1.262、15.886±1.388、12.829±1.339、7.714±1.296个（每×400倍光镜视野）。由此可见，视神经损伤后对照组、治疗组RGCs数目均呈下降趋势，但治疗组RGCs数均高于对照组RGCs数，差异均有显著统计学意义（P0.05）。 2视网膜CD11b和TNF-α免疫组化染色，半定量检测： 2.1CD11b在视网膜中的表达 正常组小胶质细胞呈棕黄色淡染、胞体小、分枝状，对照组和治疗组活化的小胶质细胞数量明显增加，突起变短、变粗，聚集在凋亡的节细胞及细胞碎片周围。正常组AOD值无明显差异；对照组1、4、7、14天AOD值分别为：0.291±0.013、0.482±0.027、0.217±0.008、0.146±0.012；治疗组分别为：0.236±0.007、0.428±0.021、0.184±0.008、0.074±0.012；据上所示：对照组1天时小胶质细胞阳性表达显著增加，4天达峰值，之后激活程度逐步下降，治疗组各时间点小胶质细胞的阳性表达也增多，但均低于对照组阳性表达（P0.05）；同时，治疗组、对照组阳性表达均高于正常组（P0.05）。差异均有统计学意义。 2.2TNF-α在视网膜中的表达 正常组SD大鼠未检测到阳性表达的TNF-α，对照组、实验组TNF-α在1天时就有显著阳性表达，4天达高峰，14天仍有较弱的表达，呈棕黄色染色，主要表达在视网膜的内、外丛状层和外核层的胞浆中。各时间点AOD值：对照组分别为0.505±0.134、0.758±0.144、0.360±0.029、0.196±0.093；治疗组分别为：0.393±0.081、0.632±0.125、0.247±0.039、0.078±0.016；据上所示：治疗组和对照组的阳性表达均高于正常组（P0.05），有统计学意义；4天时治疗组低于对照组阳性表达（P0.05），有统计学意义；1、7、14天时治疗组也均低于对照组阳性表达（P0.01），差异有显著统计学意义。 结论： 1视神经损伤后RGCs排列紊乱，数量减少。米诺环素可以减少RGCs的丢失，减轻其损伤，说明米诺环素对视神经损伤后的视网膜神经节细胞有一定的保护作用。 2视神经损伤后，小胶质细胞活化，可表达TNF-α。 3正常情况下，小胶质细胞具有组织保护作用，视神经损伤后，小胶质细胞对RGCs具有毒害作用。 4视神经损伤后，治疗组各时间点视网膜组织中小胶质细胞、TNF-α的表达较对照组均减少，较正常组均增加，说明小胶质细胞、TNF-α参与了视神经损伤与修复的过程。 5CD11b及TNF-α的AOD表达差异均有统计学意义（P0.05），表明米诺环素可能是通过抑制小胶质细胞的活化，减少TNF-α的表达，降低炎性反应，从而减轻视神经损伤。
【关键词】：米诺环素 视神经损伤 视网膜神经节细胞 小胶质细胞 CD11b TNF-α
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11
• 材料与方法11-15
• 结果15-18
• 附图18-27
• 附表27-29
• 讨论29-33
• 结论33
• 参考文献33-37
• 综述 米诺环素与视神经视网膜疾病的研究进展37-47
• 参考文献43-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：363945