PEI-质粒纳米粒子对体外培养新生C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜转染效果观察

发布时间：2022-09-30 17:54

　　目的观察以25kDa线性聚乙稀亚胺（linear plyethylenimine,L-PEI）和分枝PEI（branched PEI,B-PEI）作为表达绿色荧光蛋白的质粒pEGFP-C1的载体,转染体外培养新生C57BL/6J小鼠基底膜的效果。方法25kDa线性或分枝PEI与质粒在5%葡萄糖溶液或PBS溶液中形成纳米粒子后,行透射电镜观察纳米粒子表征;按相同方法制备纳米粒子,行凝胶阻滞实验并在培养的293T细胞中行MTT毒性测试,选择毒性较小的PEI类型作为质粒载体在293T细胞检测其转染效果;以最适条件用其转染体外培养新生C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜并行荧光镜观察。结果在相同条件下,B-PEI转染能力略强于L-PEI,但L-PEI毒性明显低于B-PEI;在PBS中制备的L-PEI-pDNA纳米粒子的毒性小于在葡萄糖溶液中制备的该粒子毒性;L-PEI-pDNA纳米粒子在适宜浓度范围可以转染体外培养新生小鼠耳蜗基底膜的螺旋缘纤维细胞、螺旋神经元、支持细胞,但转染效率不高。结论 L-PEI可作为转染新生小鼠耳蜗基底膜细胞的非病毒载体,但需要进一步优化获得更好的转染效果。 

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1实验动物
    1.2主要材料
    1.3 实验方法
        1.3.1纳米粒子的制备及透射电镜观察
        1.3.2凝胶阻滞实验
        1.3.3 MTT毒性实验
        1.3.4 pEGFP-C1-L-PEI纳米粒转染293T细胞
        1.3.5纳米粒转染体外培养的小鼠基底膜
        1.3.6转染后小鼠耳蜗基底膜免疫荧光染色
        1.3.7统计学方法
2 结果
    2.1 pEGFP-C1-PEI纳米粒子的透射电镜观察结果
    2.2凝胶阻滞结果
    2.3 MTT毒性实验结果
    2.4 pEGFP-C1-L-PEI纳米粒转染293T细胞荧光观察及流式分析
    2.5 pEGFP-C1-L-PEI纳米粒子转染体外培养的小鼠基底膜荧光观察
    2.6转染后小鼠耳蜗基底膜组织不同部位免疫荧光染色结果
3讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]大鼠耳蜗器官培养及其组织学检查技术[J]. 付勇,丁大连,Richard Salvi.  中国耳鼻咽喉头颈外科. 2009(11)



本文编号：3684003