rAAV-HGFK1治疗视网膜新生血管性疾病的研究

发布时间：2023-03-19 21:13

　　目的:眼部新生血管疾病包括增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)、湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)、早产儿视网膜病变(ROP),此类疾病在发达国家已经成为从婴幼儿到老年人各个年龄阶段致盲和视力障碍的最主要原因,在中国亦是严重致盲性眼病之一,严重影响了患者的生活质量。目前对于此类疾病的临床治疗包括都存在损伤组织、容易复发的特点,使此类疾病致盲的人群仍然不断扩大。因此研究基于控制新生血管发生发展的新型治疗模式十分必要。新生血管生成是一个多因素参与的复杂病理过程,以VEGF为代表的多种生长因子在其发生发展过程中起作用。HGF是一种内皮特异性生长因子,与视网膜血管内皮细胞的酪氨酸激酶受体c-met结合刺激其增殖及迁移。最新研究发现PDR患者的血清与玻璃体中HGF的浓度显著升高,同时体外实验发现HGF具有较强的促视网膜内皮细胞有丝分裂活性,提示HGF通路是视网膜新生血管生成的重要中间途径之一。而HGF的一些结构域分子具有抗血管生成活性,如HGF的α链包含4个Kringle结构域和氨基末端发夹结构域(NK4)具有抗VEGF诱导的新生血管生成作用,Kringle1-4,N末端结构域及Kringle1也同样...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
绪论
第一部分：rAAV-HGFK1对牛视网膜微血管内皮细胞的影响
    1 前言
    2 材料与方法
        2.1 主要材料和试剂
        2.2 主要仪器
        2.3 牛视网膜微血管内皮细胞的培养
        2.4 牛视网膜微血管内皮细胞的鉴定
        2.5 rAAV-HGFK1对牛视网膜微血管内皮细胞增殖的影响
        2.6 rAAV-HGFK1对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡的影响
        2.7 免疫印迹分析(Western blot)
            2.7.1 蛋白样品的制备
            2.7.2 操作过程
        2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 牛视网膜微血管内皮细胞的原代培养
        3.2 牛视网膜微血管内皮细胞的传代培养
        3.3 BREC的鉴定
        3.4 rAAV-HGFK1对BREC体外增殖的影响
        3.5 rAAV-HGFK1对BREC凋亡的影响
        3.6 rAAV-HGFK1通过MAPK途径调节BREC
    4 讨论
第二部分：低氧诱导的小鼠视网膜病变模型的建立及观察
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要材料和试剂
        2.2 主要仪器和设备
        2.3 实验动物
        2.4 OIR小鼠模型的建立
        2.5 rAAV-HGFK1感染小鼠视网膜的检测
        2.6 视网膜新生血管增殖病变鉴定及定量分析
        2.7 荧光眼底血管造影检测
    3 结果
        3.1 低氧诱导小鼠视网膜病变模型的建立
        3.2 视网膜新生血管增殖性病变的定量分析
        3.3 AAV作为载体感染视网膜细胞的鉴定
    4 讨论
第三部分：rAAV-HGFK1对OIR模型小鼠视网膜新生血管病变的影响
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要材料和试剂
        2.2 主要仪器和设备
        2.3 动物模型的建立与处理
        2.4 视网膜新生血管增殖病变鉴定及定量分析
        2.5 荧光眼底血管造影检测
        2.6 S-P法免疫组化(CD31)检测血管内皮细胞
        2.7 EnVision法免疫组化(VEGF)
    3 结果
        3.1 新生血管增殖的定量分析
        3.2 新生血管增殖的定性分析
        3.3 免疫组织化学检测CD31及VEGF的表达
        3.4 实验动物的称重
    4 讨论
    5 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
    参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历



本文编号：3765989