一个新的DFNA5剪接位点突变及其功能研究

发布时间：2024-09-18 09:49

　　DFNA5是导致非综合征性耳聋的常染色体显性遗传的基因,与别的常染色体显性遗传基因的突变异质性不同,目前已知的所有致聋突变类型均为导致第八外显子跳跃的剪接位点突变。DFNA5除了与耳聋相关,还发挥抑癌基因的功能,最新的研究表明DFNA5是引发细胞继发性坏死的重要的效应蛋白。尽管对于DFNA5蛋白功能的了解越来越深入,但是关于DFNA5剪接位点突变致聋的机制尚不明确。目的:通过一个常染色体显性遗传的耳聋大家系,筛选出致病基因。通过生物信息学分析预测DFNA5蛋白的功能,构建第八外显子跳跃突变型质粒,转染不同细胞系研究DFNA5的分子功能,分析可能的致聋机制。方法:1.临床收集一个常染色体显性遗传耳聋家系,提取家系成员的外周静脉血DNA,通过全外显子捕获的方法寻找影响高频听力的的致病基因。提取该家族耳聋患者与听力正常人血样中的mRNA,逆转录PCR结合Sanger测序,验证剪切位点突变导致的mRNA改变。2.通过多序列比对工具寻找DFNA5同家族蛋白质保守性序列;用SWISS-MODEL工具预测DFNA5蛋白三级结构并推测突变型DFNA5蛋白可能的功能。3.采用基因克隆技术构建野生型与突变型...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1.1程序性细胞坏死[2]

阴性菌的脂多糖结合[17]，非经典途径与经典途径只是存在起始C后期引发细胞焦亡的过程相似。不论是经典途径的Caspase-1或是Caspase-4/5/11，这些炎性Caspase都能够劈开共同的底物GSDM死作用的GSDMD-N端，继而使细胞膜通透性改变，使....

图2.1家系图（HaploPainter软件绘制）

第2章实验研究患者79岁，最小患者10岁。第II代2位患者，年龄75-79岁，有残余听力。第Ⅲ代9位患者，主诉发病年龄在30-35岁左右，年轻时有患过中耳炎（Ⅲ:3，Ⅲ:4，Ⅲ:10），近期检查未见鼓膜异常。第IV代3位患者，发病年龄分别....

图2.2安捷伦外显子捕获流程图

图2.2安捷伦外显子捕获流程图ina平台测序Illumina平台测序是基于桥式PCR以及荧光可逆终止子的边合成边测测序反应是在flowcell中进行，每个flowcell有八条通道，由于DNA已经连接与通道上序列互补的序列，所以文库片段会与通道表面上的单补结....

图2.3Illumina平台测序流程图

图2.3Illumina平台测序流程图3.6测序数据处理(1)使用FastQC软件把Illumina平台测序得到的原始数据中低质量rea；(2)使用SOAPaligner软件对测序得到reads与参考序列比对，将比对eads进行后续SNP注释....

本文编号：4005956