CIK细胞在鼻咽癌治疗的研究及其TLR的表达情况

发布时间：2017-07-29 23:15

  本文关键词：CIK细胞在鼻咽癌治疗的研究及其TLR的表达情况

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【摘要】：目的:本实验观察采用CIK细胞治疗鼻咽癌的近期临床疗效，并研究CIK细胞中Toll样受体mRNA（TLR1～TLR10）的表达情况，进一步阐述CIK细胞的抗瘤机制，评价CIK细胞临床过继免疫治疗的可行性。 方法: 1．选取符合条件的确诊中晚期初治鼻咽癌患者20例，以年龄、性别和治疗方法将他们随机分成实验组（放疗+化疗+CIK治疗）和对照组（放疗+化疗）。通过观察两组患者不同方法治疗后的生活质量、身体状况（饮食、睡眠及体重）及应用SDS、SAS对两组患者进行治疗前后的心理状况评价，，同时观察患者对CIK细胞回输后的临床反应。计量资料用χ±s表示，采用配对t检验。 2．抽取健康志愿者静脉血，采用Ficoll淋巴分离液密度离心法分出PBMC，参考文献报道标准的CIK细胞培养方法培养CIK细胞生成。 3．分别于第3天、6天、9天、12天、15天用细胞计数板计数法计算CIK增殖细胞数量，于第15天用流式细胞仪检测CIK细胞表面CD3、CD56分子的表达情况，用RT-PCR法分别检测PBMC和CIK细胞第9天、12天、15天TLR1～TLR10的mRNA表达情况。 结果 1、鼻咽癌患者经CIK细胞回输后，与单纯放化疗对照组相比，实验组的生活质量、身体状况及精神、心理状况明显改善。 2、PBMC经多种细胞因子（INF-γ、IL-2、IL-1β、MabCD3等）刺激后，第6天开始明显增殖，第15天左右细胞增殖达高峰，流式细胞仪检测细胞表面CD3、CD56显示成功培养成CIK细胞。 3、CIK细胞与对照组外周血单个核细胞（PBMC）相比，TLR1～TLR10的表达存在差异：PBMC中TLR均有不同程度的表达；在CIK细胞中TLR1的表达增强，TLR4的表达减弱；TLR9在两种细胞均有较高的表达。 结论 1．CIK细胞能够提高鼻咽癌患者的生活质量、身体状况及精神、心理状态，无明显不良反应。进一步证明CIK细胞过继免疫治疗对提高肿瘤患者生活质量、精神状态及免疫力方面具有独特的优势，可作为肿瘤放化疗的辅助治疗方案。 2．TLR在PBMC及CIK细胞中的表达具有选择性，CIK细胞的杀瘤活性可能与TLR的表达相关。
【关键词】：CIK TLR 鼻咽癌 过继免疫
【学位授予单位】：广东药学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-14
• 第一部分 CIK 细胞在鼻咽癌治疗的研究14-25
• 引言14-15
• 材料与方法15-21
• 2.1 材料15
• 2.1.1 实验对象15
• 2.1.2 实验仪器及试剂15
• 2.2 方法15-16
• 2.2.1 设计方案15
• 2.2.2 观察于记录15-16
• 2.2.3 统计学处理16
• 2.3 结果16-18
• 2.3.1 入选患者一般情况16
• 2.3.2 生活质量、身体状况（饮食、睡眠及体重）改善情况16-17
• 2.3.3 心理状况评价17-18
• 2.4 讨论18-21
• 参考文献21-25
• 第二部分 CIK 细胞中 TLR 的表达情况25-40
• 引言25-26
• 材料与方法26-37
• 1.1. 材料26-27
• 1.1.1 实验样本26
• 1.1.2 主要实验仪器26-27
• 1.1.3 主要实验试剂及生产厂家27
• 1.2 方法27-30
• 1.2.1 实验样本收集27-28
• 1.2.2 CIK 细胞28-29
• 1.2.3 RNA 提取29
• 1.2.4 RT-PCR 反应29-30
• 1.3 结果30-34
• 1.3.1 外周血分离出 PBMC 及第 3 天、6 天、9 天、12 天、15 天 CIK 细胞培养结果30-31
• 1.3.2 流式细胞仪测定 CIK 细胞培养前后细胞免疫表型31-32
• 1.3.3 健康人外周 PBMC 及 CIK 细胞第 9 天、12 天、15 天的 TLR 表达情况32-34
• 1.4 讨论34-37
• 参考文献37-40
• 全文小结与建议40-42
• 综述42-50
• 参考文献46-50
• 附录一 英文缩略词表50-51
• 附录二 SAS、SDS 表51-53
• 附录三 引物列表53-54
• 致谢54

【参考文献】

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本文编号：591539