STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌细胞CNE2中的表达变化及意义

发布时间：2017-08-11 13:11

  本文关键词：STAT3、MMP-2及CyclinD1在EGCG抗鼻咽癌细胞CNE2中的表达变化及意义

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【摘要】：目的：鼻咽癌是我国广东、广西及福建等南方地区的常见恶性肿瘤之一，目前其主要治疗方法是放疗加化疗等综合性治疗，但其5年生存率只有50%左右，晚期病人的治疗效果及生存时间更差。本研究旨在观察表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）体外对鼻咽癌CNE2细胞的生长影响，同时通过分析其过程中的STAT3、MMP-2、CyclinD1的表达变化，揭示EGCG抗鼻咽癌的机制，为开发与寻找新药以提高鼻咽癌的治疗效果提供实验依据。 方法：1.实验室体外条件下培养鼻咽癌低分化细胞株CNE2，用不同浓度的EGCG（0、40、80、160mg/L）干预24h、48h、72h后，分别于倒置显微镜下观察CNE2细胞的形态学改变。2.使用不同浓度的EGCG作用CNE2细胞24h、48h、72h后，应用MTT法间接检测细胞增殖的变化，并计算其增殖抑制率。3.使用不同浓度的EGCG作用于CNE2细胞48h后，使用Hoechst33258染色观察细胞凋亡情况，并计算其凋亡率。4.应用Transwell细胞侵袭实验检测不同浓度EGCG作用后的CNE2细胞侵袭作用的变化。5.使用流式细胞仪检测不同浓度的EGCG作用鼻咽癌细胞株CNE2不同时间后对细胞周期的影响。6.逆转录PCR（RT-PCR）检测EGCG抗鼻咽癌细胞株CNE2过程中STAT3、MMP-2、CyclinD1的表达变化。 结果：1.倒置显微镜下观察，发现CNE2细胞分裂相变少，，部分细胞变圆，随着EGCG浓度的增加和作用时间的延长，培养瓶中出现越来越多的细胞漂浮及坏死的现象。2.MTT法检测结果显示，随着EGCG的浓度增加及作用时间延长，EGCG对鼻咽癌细胞株CNE2的增殖抑制作用不断增加，且呈浓度与时间依赖性（p0.05）。3.Hochest33258染色结果显示，EGCG处理CNE2细胞后出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩等。与对照组比较，随着EGCG浓度的增加，凋亡细胞数不断增多（p＜0.05）。4.流式细胞仪检测结果显示：不同浓度的EGCG(0、40、80、160mg/L)分别作用于CNE2细胞24h、48h后，停滞在G1/G0期细胞百分率分别为：（46.67±0.38）%、（55.20±0.33）%、（62.33±0.28）%、（68.65±0.40）%和（49.12±0.28）%、（57.73±0.45）%、（64.36±0.26）%、（69.62±0.33）%。与对照组比较，各实验组G1/G0期细胞百分率明显增加(P0.05)，各实验组两两比较差异显著(P0.05)，呈浓度与时间依赖性。5.不同浓度EGCG作用CNE2细胞后，Transwell细胞侵袭实验结果显示：随着EGCG浓度的升高，与对照组相比，CNE2细胞的侵袭作用呈浓度依赖性减弱（p0.05）。6.逆转录PCR（RT-PCR）检测结果显示：CNE2细胞中STAT3、MMP-2、CyclinD1mRNA的相对表达量随着EGCG浓度升高与作用时间延长有降低趋势（P0.05）。 结论：1.EGCG呈浓度依赖性与时间依赖性下调STAT3mRNA的表达，这可能作为EGCG抗鼻咽癌的生物学作用机制之一。2.EGCG抑制CNE2细胞的侵袭作用，可能与其呈浓度依赖性与时间依赖性下调MMP-2mRNA的表达相关。3.EGCG抑制CNE2细胞的增殖，诱导其凋亡，可能与其呈浓度与时间依赖性下调CyclinD1mRNA的表达相关。
【关键词】：EGCG STAT3 MMP-2 CyclinD1 鼻咽癌 凋亡
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英汉缩略词对照表9-10
• 前言10-13
• 1 材料与方法13-26
• 1.1 实验材料与仪器13-15
• 1.2 实验方法15-26
• 2 结果26-36
• 2.1 EGCG作用CNE2细胞的形态变化观察26-27
• 2.2 EGCG对CNE2细胞增殖的抑制作用27-28
• 2.3 Hochest33258染色观察EGCG诱导CNE2细胞的凋亡28-29
• 2.4 EGCG对细胞周期的影响29-31
• 2.5 EGCG对CNE2细胞侵袭作用的影响31-32
• 2.6 EGCG对CNE2细胞STAT3、MMP-2及CyclinD1mRNA的影响32-36
• 3 讨论36-43
• 4 结论43-44
• 参考文献44-49
• 综述49-63
• 参考文献56-63
• 攻读学位期间发表的学术论文目录63-64
• 致谢64

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本文编号：656282