喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取方法的比较

发布时间：2017-08-20 16:03

  本文关键词：喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取方法的比较

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【摘要】：目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考。方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理。收集90ml培养上清液,先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法,将上清液浓缩提纯;收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对2种方法所得的exosomes浓缩液分别鉴定,作出评价。结果:2种方法均能成功地从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes。单个高倍视野下,蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取exosomes分散性较好,但密度较低,背景见杂质较多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列紧密,密度较高,背景杂质较少。结论:2种方法各具特点,均是较理想的exosomes分离提取方法。利用Exosome Isolation Kit分离提取exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点,为喉癌Hep-2来源exosomes的分离提取提供了较好的选择。
【作者单位】： 广州市第一人民医院耳鼻咽喉科;广州医科大学实验医学研究中心;
【关键词】： exosomes 蔗糖密度梯度离心 超滤离心 Exosome Isolation Kit
【基金】：广东省科技厅产业技术研究与开发资金计划项目(No:2012B031800340) 广州市科技和信息化局社会发展应用基础研究专项(No:2013J4100024)
【分类号】：R739.65
【正文快照】： 在exosomes被Johnstone等〔1〕分离并命名的近30年间,由于其在肿瘤诊断及治疗方面的潜能,受到了广大的关注,当exosomes的应用前景、研究价值吸引人们的注意时,其分离提取方法却鲜有突破。人的尿液、血液、前列腺液、羊水、精液及恶性胸腹水等体液中均发现exosomes,且肿瘤细胞

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3 王e，

本文编号：707530