致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

发布时间：2017-08-21 16:34

  本文关键词：致白内障基因Hsf4b K65R位点突变对下游热休克蛋白表达的影响

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【摘要】：目的:探讨致白内障基因热休克因子4b(Hsf4b)K65R位点突变对其调控下游热休克蛋白(HSP)表达的影响。方法:采用KOD-Plus-Mutagenesis-Kit试剂盒构建pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R赖氨酸突变质粒;通过慢病毒感染小鼠晶状体上皮细胞mLEC构建稳定表达Hsf4b/K65R突变质粒的细胞株;Western blotting检测Hsf4b在mLEC K65R点突变细胞株和野生株中的表达;Western blotting及real-time PCR检测K65R点突变后下游蛋白Hsp70、Hsp90、Hsp27和CryAB表达的变化。结果:阳性克隆PCR及基因测序证明慢病毒载体pWZL-blast-HAHsf4b/K65R构建成功。K65R点突变后不影响Hsf4b在小鼠晶状体上皮细胞mLEC中的表达,但能影响下游蛋白CryAB、Hsp27、Hsp70i和Hsp90a的表达。结论:pWZL-blast-HA-Hsf4b/K65R载体可用于慢病毒感染稳定细胞株构建。Hsf4b K65R位点突变能显著影响其对热休克蛋白的调控功能。
【作者单位】： 河南大学医学院医学与分子免疫学实验室抗体药物河南省工程实验室;
【关键词】： 热休克因子b 晶状体上皮细胞 热休克蛋白 点突变
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.U1404826) 河南省教育厅项目(No.14B310015) 河南大学基本科研业务费科研专项(青年科研人才种子基金)
【分类号】：R776.1
【正文快照】： 先天性白内障是导致儿童失明的主要原因,其主要病理改变为晶状体发育迟缓、晶状体内非透明瘢块组织形成。热休克因子4b(heat shock factor 4b,Hsf4b)主要在晶状体内表达,是调控新生儿期晶状体发育的关键转录因子,其通过调控热休克蛋白(heat shock protein,HSP)和晶状体蛋白的

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张军;马增翼;李淑莲;刘广超;胡延忠;;HSF4B通过上调RhoA和Rac1促进晶状体上皮细胞迁移[J];中国生物化学与分子生物学报;2013年04期

2 吴明星;吴开力;卞庆宁;姬红培;王忠浩;刘奕志;;年龄相关性白内障晶体上皮细胞的基因表达谱变化的初步分析[J];中国病理生理杂志;2006年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 贾松柏;石晶明;陈，

本文编号：713993