大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

发布时间：2017-08-23 02:13

  本文关键词：大鼠骨髓间充质干细胞培养及体外诱导向神经元样细胞分化的研究

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【摘要】：目的：建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外培养体系,诱导分化为神经元样细胞,筛选较好的体外诱导方法,为下一步内耳移植实验提供前期研究基础。 方法：LBMSCs培养：主要采用全骨髓直接贴壁法培养BMSCs并传代,取P3代行流式细胞仪检测BMSCs表面标志CD29, CD90及造血细胞表面抗原CD45的表达。2.取P4代BMSCs,由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h后,分别加入：A组诱导剂：神经营养素3(NT-3),维甲酸(RA)；B组诱导剂：p-硫基乙醇(BME)。诱导lh,5h,24h,7d,14d,21d后,采用细胞免疫荧光方法鉴定,检测成熟神经元标志物神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达情况,观察两组是否有染色阳性的神经元样细胞及比较阳性率的高低。 结果：1.全骨髓贴壁筛选法简便,所获得的细胞数量多,增殖分化快。2.流式细胞仪检测BMSCs表达CD90、CD29;不表达CD45,结合细胞形态分析,符合BMSCs的特征。3.细胞免疫荧光结果示NSE阳性表达,A组诱导分化为神经元样细胞的阳性率明显高于B组。 结论：1.全骨髓贴壁筛选法分离培养的BMSCs所获得的细胞数量多,增殖分化快,纯度高。2.采取分步诱导和联合诱导BMSCs,由bFGF预诱导24h后,换用NT-3+RA诱导分化为神经元样细胞NSE阳性率明显高于BME诱导,是一种比较好的诱导方案。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 诱导方法 神经元样细胞 内耳移植
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R764.43
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目录7-9
• 符号说明9-10
• 1 前言10-12
• 2 BMSCs的分离培养及鉴定12-23
• 2.1 实验材料与试剂12-13
• 2.1.1 实验动物12
• 2.1.2 主要实验仪器设备12
• 2.1.3 主要试剂12-13
• 2.1.4. 基本试剂的配制13
• 2.1.5 实验器械13
• 2.2 实验方法13-16
• 2.2.1 技术路线13-14
• 2.2.2 BMSCs的分离和培养14-15
• 2.2.3 BMSCs表面标志物的鉴定15-16
• 2.3 实验结果16-20
• 2.3.1 不同培养时间BMSCs形态变化16-19
• 2.3.2 BMSCs的流式细胞仪结果19-20
• 2.4 讨论20-23
• 2.4.1 鼠龄的选择20-21
• 2.4.2 BMSCs的取材分离及纯化21
• 2.4.3 BMSCs的培养21-22
• 2.4.5 存在的问题22-23
• 3 BMSCs的体外诱导分化23-34
• 3.1 材料与方法23-24
• 3.1.1 主要仪器设备23
• 3.1.2 主要试剂及耗材23-24
• 3.1.3 主要试剂及培养液的配置24
• 3.2 实验方法24-25
• 3.2.1 技术路线24
• 3.2.2 BMSCs诱导分化成神经样细胞24-25
• 3.2.3 细胞免疫荧光鉴定25
• 3.2.4 BMSCs诱导分化成神经样细胞分化率的比较25
• 3.3 结果25-29
• 3.3.1 细胞形态学变化25-27
• 3.3.2 细胞免疫荧光鉴定结果27-29
• 3.3.3 BMSCs诱导后NSE阳性表达率29
• 3.4 讨论29-34
• 3.4.1 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导方法29-30
• 3.4.2 BMSCs诱导分化成神经样细胞的诱导分化机制30-32
• 3.4.3 BMSCs诱导分化成神经元细胞样细胞的检测32-33
• 3.4.4 BMSCs诱导分化成神经样细胞的应用前景33-34
• 4 结论34-35
• 参考文献35-43
• 综述43-52
• 参考文献48-52
• 攻读学位期间主要的研究成果52-53
• 致谢53-54

【参考文献】

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本文编号：722389