辛伐他汀对大鼠视网膜缺血再灌注中Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响

发布时间：2017-08-23 04:32

  本文关键词：辛伐他汀对大鼠视网膜缺血再灌注中Bcl-2和Bax表达及细胞凋亡的影响

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【摘要】：目的： 1.采用夹闭大鼠右侧颈总动脉的方法,建立视网膜缺血再灌注损伤模型。观察缺血再灌注后视网膜各层形态结构的变化、Bcl-2(The B-cell leukemia/lymphoma-2)和Bax (Bcl-2-Associated X)的变化趋势以及视网膜细胞的凋亡情况。 2.初步探讨辛伐他汀在大鼠眼部缺血再灌注损伤中的作用,为将来治疗眼部缺血再灌注损伤提供新的理论依据。 方法： 1.采用夹闭颈总动脉的方法造模。选取健康成年SD雄性大鼠165只,数字表法随机分为对照(CON)组、模型(MOD)组和药物(SIM)组,每组55只,每组分4h、8h、16h、24h、48h,总共5个时间点,各时间点11只。模型组、药物组夹闭右侧颈总动脉,对照组暴露右颈总动脉不夹闭。 2.分别在处理4h、8h、16h、24h、48h后对对照(CON)组、模型(MOD)组和药物(SIM)组大鼠脱颈处死,制作眼球标本行HE染色观察视网膜各层形态结构的变化,免疫组织化学染色检测Bcl-2和Bax的蛋白表达水平,提取视网膜RNA用Real Time RT-PCR方法检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平,采用Tunel法检测视网膜各层的细胞凋亡情况。 结果： 1.HE染色结果显示：对照组各层结构无异常。模型组8h时视网膜出现水肿；16h时水肿加重,出现RGCs数目减少,INL层变薄；24h时水肿基本消失,RGCs数目继续减少,INL进一步变薄；48h时视网膜变薄。药物组8h和16h时较模型组视网膜组织水肿减轻；16h、24h及48h和模型组相比,RGCs减少较低,视网膜INL厚度改变不明显。 2.免疫组织化学结果显示：模型组Bcl-2于4h开始下降,在24h达到最低值,与对照组差异有统计学意义(P0.05)；药物组各时间点均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48=8.079,9.005,9.904,35.563,8.810,P0.05)。模型组Bax从4h开始上升,24h达到高峰,与对照组差异有统计学意义(P0.05)；药物组各时间点均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48=16.601,13.525,10.303,25.849,13.805,P0.05)。 3. Real Time RT-PCR方法结果显示：Bcl-2mRNA在模型组各组均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)；而药物组各组均高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48=112.934,109.750,3534.800,112.428,128.140,P0.05)。Bax mRNA在模型组各组均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)；而药物组各组均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,8,16,24,48=74.115,54.504,81.271,243.743,97.163,P0.05)。 4.Tunel法结果显示：模型组细胞凋亡指数从4h开始上升,24h达到高峰,与对照组差异有统计学意义(P0.05)；药物组低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。各组相应时间点相比较,差异有统计学意义(F4,836,24,48=87.096,232.245,575.564,389.205,771.658,P0.05)。 结论： 1.本研究采用夹闭颈总动脉的方法成功建立大鼠视网膜缺血再灌注模型：模型组Bcl-2的表达减少,Bax的表达增加,视网膜厚度出现短暂水肿,RGCs数目减少,INL变薄,凋亡细胞数目增加。 2.药物组与模型组相比较,Bcl-2的表达增加,Bax的表达降低,视网膜厚度改变不明显,RGCs数目减少较低,凋亡细胞数目降低。因此,凋亡基因Bcl-2和Bax的比例变化在视网膜缺血再灌注中对于细胞凋亡具有重要的作用。 3.辛伐他汀,可能通过调节视网膜缺血再灌注中凋亡基因Bcl-2和Bax的表达来抑制细胞凋亡。这可能成为视网膜缺血再灌注损伤预防和治疗的新途径。
【关键词】：辛伐他汀 再灌注损伤 视网膜 细胞凋亡 Bcl-2/Bax
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-12
• 前言12-14
• 研究现状、成果12-13
• 研究目的、方法13-14
• 对象与方法14-23
• 1 实验动物、主要仪器与试剂14-15
• 2 实验方法15-22
• 3 统计学处理22-23
• 结果23-29
• 1 大鼠视网膜组织HE染色结果23
• 2 Bcl-2和Bax免疫组化检测结果23-25
• 3 Bcl-2和Bax实时焚光定量PCR检测结果25-27
• 4 Tunel检测结果27-29
• 讨论29-33
• 结论33-34
• 论文创新点34-35
• 参考文献35-38
• 发表论文和参加科研情况说明38-39
• 综述39-52
• 综述参考文献49-52
• 致谢52

【引证文献】

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1 沈捷;眶内及眶外针刺对兔前部缺血性视神经病变中Bax及Bcl-2表达影响的研究[D];北京中医药大学;2016年

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本文编号：722992