鼻咽癌中STGC3基因与mTOR通路相关蛋白质表达分析及意义

发布时间：2017-08-24 18:01

  本文关键词：鼻咽癌中STGC3基因与mTOR通路相关蛋白质表达分析及意义

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【摘要】：目的：采用敲低STGC3基因表达的NP69细胞系，检测mTOR、pmTOR及下游效应分子S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白的表达水平，进一步验证mTOR相关蛋白分子在鼻咽癌细胞系及组织中的表达与意义，分析mTOR相关蛋白分子与STGC3间的关系，探明STGC3蛋白的相关分子网络，为阐明鼻咽癌发病分子机制提供新的实验依据。 方法：采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞系，鼻咽癌组织及非鼻咽癌组织中mTOR信号通路相关分子mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1及p4E-BP1的mRNA和蛋白表达情况；应用免疫组化SP法，检测上述蛋白质分子在鼻咽癌组织中的表达。 结果：RT-PCR结果显示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞系和鼻咽癌组织中mTOR、S6的mRNA表达水平增高，；而4E-BP1mRNA表达降低，差异均有统计学意义(p0.05)。NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2细胞系中mTOR mRNA的表达强度分别为0.371±0.047，0.806±0.036，0.352±0.026，0.838±0.041，0.805±0.025； S6mRNA的表达强度分别为0.881±0.055，1.340±0.057，0.843±0.041，1.405±0.089，1.351±0.073；4E-BP1mRNA的表达强度分别为0.451±0.035，0.250±0.024，0.457±0.030，0.275±0.025，0.302±0.039； mTOR、S6、4E-BP1在鼻咽癌组织中的mRNA表达强度分别为0.689±0.044，0.898±0.031，0.341±0.027，在非鼻咽癌组织中的表达强度分别为0.409±0.046，0.489±0.051，0.659±0.038。 Western blot结果显示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2细胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表达水平增高，4EBP1蛋白的表达降低，差异均有统计学意义(p0.05)。但S6在上述各细胞系中的表达无显著差异(p0.05)，NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2细胞系中mTOR蛋白的表达强度分别为0.487±0.037，0.719±0.054，0.606±0.049，0.819±0.036，0.905±0.049；pmTOR蛋白的表达强度分别为0.207±0.037，0.918±0.036，0.304±0.039，0.964±0.039，0.941±0.061；S6表达强度分别为0.863±0.038，0.888±0.043，0.798±0.049，0.901±0.043，0.909±0.048。pS6蛋白的表达强度分别为0.233±0.015，0.418±0.023，0.201±0.025，0.360±0.022，0.332±0.027；4E-BP1蛋白的表达强度分别为0.902±0.050，0.598±0.034，0.903±0.023，0.608±0.032，0.661±0.023；p4E-BP1蛋白的表达强度分别为0.291±0.014，0.454±0.022，0.277±0.025，0.484±0.019，0.510±0.026。 鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4E-BP1蛋白的表达增高，4E-BP1的表达降低。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1的蛋白表达强度分别为0.745±0.028，0.573±0.041，0.900±0.033，0.427±0.024，0.494±0.026，0.769±0.024；非鼻咽癌组织中的表达强度分别为0.531±0.037，0.423±0.017，0.606±0.027，0.213±0.023，0.920±0.025，，0.435±0.026，差异均具有统计学意义(p0.05)。 免疫组化结果显示：mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白主要表达于鼻咽癌细胞胞浆内，呈淡黄色至棕黄色。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4EBP1蛋白阳性表达率增高，4E-BP1蛋白阳性表达率降低，差异均有统计学意义(p0.05)。鼻咽癌组织中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4EBP1蛋白阳性表达率分别为83.33%(10/12)、75%(9/12)、66.66%(8/12)、83.33%(10/12)、33.33%(4/12)、91.66%(11/12)，非鼻咽癌组织中阳性表达率分别为30.76%(4/13)、38.46%(5/13)、23.07%(3/13)、38.46%(5/13)、83.33%(10/13)、33.33%(4/13)，差异均有统计学意义(p0.05)。 结论： 1.敲低STGC3基因在NP69细胞的表达，NP69细胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表达增高，4E-BP1蛋白表达降低，STGC3低表达可导致NP69细胞中mTOR通路的激活。 2.鼻咽癌组织及细胞系中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4E-BP1蛋白高表达，4E-BP1蛋白低表达，存在mTOR通路激活。
【关键词】：STGC3 mTOR S6 4E-BP1 鼻咽癌
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 技术路线13-14
• 材料与方法14-22
• 结果22-37
• 讨论37-41
• 结论41-42
• 参考文献42-49
• 附录一49-52
• 附录二52-53
• 综述53-60
• 参考文献57-60
• 硕士在读期间发表的论文60-61
• 致谢61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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本文编号：732716