EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响

发布时间：2017-08-28 11:36

  本文关键词：EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响

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【摘要】：目的 :制备重组慢病毒载体p LMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、迁移、侵袭的影响。方法 :利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表达载体plv-GFP中,通过酶切、测序验证,将重组慢病毒载体p LMP2A与包装质粒pdelta-8.91、p VSVG共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌细胞CNE1,经单克隆筛选后,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot检测LMP2A在人鼻咽癌细胞CNE1的表达,CCK8法检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响,划痕实验、Transwell侵袭实验检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭的影响。结果:酶切及测序结果表明,成功制备了重组慢病毒载体p LMP2A;RT-PCR、Western blot、免疫荧光结果显示筛选出的细胞克隆能高表达EBV-LMP2A,CCK8结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1增殖,划痕实验结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1迁移,Transwell侵袭实验结果显示LMP2A能提高人鼻咽癌细胞CNE1侵袭能力。结论:成功制备了慢病毒载体p LMP2A,包装的慢病毒能够成功感染人鼻咽癌细胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表达,并发现LMP2A能够促进人鼻咽癌细胞株CNE1增殖、迁移、侵袭,为进一步探讨EB病毒在鼻咽癌中的发病机制及基因治疗奠定了基础。
【作者单位】： 南京医科大学第二附属医院耳鼻咽喉科;南京医科大学第一附属医院肿瘤科;南京军区军事医学研究所;南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室;
【关键词】： EB病毒 潜伏膜蛋白A 鼻咽癌 慢病毒载体
【基金】：江苏省临床医学科技专项(BL2013038)
【分类号】：R739.63
【正文快照】： 南京医科大学学报EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)属人类γ亚科疱疹病毒,是传染性单核细胞增多症(infectiousmononucleosis,IM)的病原体,与鼻咽癌(nasopharyn-geal carcinoma,NPC)、Burkitts淋巴瘤(burkitt lym-phoma,BL)、胃癌(gastric carcinoma,GC)等[1]多种肿瘤的发生有关

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本文编号：747890