视网膜神经节祖细胞移植后迁徙分化及对视功能保护作用初步研究

发布时间：2017-09-03 10:31

  本文关键词：视网膜神经节祖细胞移植后迁徙分化及对视功能保护作用初步研究

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【摘要】：研究背景和目的： 视神经损伤是常见眼外伤，可导致视力障碍甚至失明，目前仍缺乏有效的临床治疗手段。近几年来，细胞移植使人们看到了视神经损伤修复研究的希望，但细胞移植仍然面临许多问题。首先干细胞具有多向分化潜能，分化具有不确定性，移植后RGCs分化率较低。其次移植细胞向损伤区域的迁徙是干细胞治疗面临的第二个问题。基质细胞衍生因子-1(Stromal-derived factor，SDF-1)可与细胞表面的CXCR4结合，活化下游G蛋白，介导细胞迁移[1]，而CXCR4特异性抑制剂AMD3100可以阻断这种细胞趋化作用。本课题小组前期研究发现，体外定向诱导RSCs向RGCs分化3d时，细胞既保留了干细胞的增殖和分化能力，同时具有了向RGCs定向分化能力，我们认为这群RSCs向RGCs分化的中间细胞为视网膜神经节祖细胞(Retinal ganglion progenitor cells,RGPCs)，其可能成为理想的种子细胞用于视神经损伤的细胞移植治疗。同时，体外研究发现，SDF-1对RGPCs具有趋化作用，而AMD3100可以阻断这种作用。在本课题中，将重点研究：1、视神经损伤后视网膜组织中的SDF-1及其受体CXCR4的表达规律；2、视神经损伤大鼠RGPCs移植后对视功能的保护作用及自身视网膜中SDF-1对移植细胞迁徙的影响。 方法： 1、RSCs的原代培养 2、RSCs向RGPCs的定向诱导分化，获取RGPCs 3、免疫荧光染色及Western Blot检测视神经损伤大鼠视网膜组织中SDF-1及CXCR4定位及定量表达 4、通过RGCs计数及电生理检测RGPCs移植后对视神经损伤大鼠视功能的保护作用 结果： 1、RSCs的培养及鉴定： RSCs形成克隆球，悬浮生长；RSCs阳性表达Nestin、Ki67及Chx10，部分细胞表达Math5，而Brn3b不表达。 2、RSCs向RGPCs的定向诱导分化及鉴定：RGPCs贴壁生长，RGPCs阳性表达Nestin、 Ki67，部分细胞表达Math5及Brn3b，而Thy1.1阴性。 3、视神经损伤大鼠视网膜组织中SDF-1及CXCR4表达规律：视神经损伤后大鼠视网膜神经纤维层及外丛状层可见SDF-1表达，表达随损伤时间出现先升高后降低的趋势，并与GFAP共表达。 4、RGPCs对视神经损伤大鼠视功能的保护作用：视神经损伤大鼠玻璃体腔移植RGPCs后分别于移植后30天、60天荧光显微镜检测少量RGPCs细胞迁移至视网膜神经节细胞层；PBS组及RGPCs组较正常组RGCs明显减少，而PBS组较RGPCs组RGCs也明显减少；F-vep检测发现PBS组及RGPCs组较正常组P波潜伏期明显延长，，幅值明显下降，而PBS组较RGPCs组P波潜伏期明显延长，幅值明显下降。 结论： 1、RGPCs同时具有一定干细胞增殖特性及向RGCs定向分化能力，可成为细胞移植治疗视神经损伤理想的种子细胞。 2、视神经损伤后，视网膜中SDF-1定位表达在神经节细胞层及外丛状层的星形胶质细胞及Müller细胞，且与GFAP共表达，而表达量随损伤时间出现先增高后降低，SDF-1表达上调可能与胶质细胞活化相关。 3、视神经损伤大鼠RGPCs玻璃体腔移植后，部分能向视网膜节细胞层迁移并分化为RGCs，电生理F-VEP显示P波波峰及潜伏期较损伤组明显改善， RGCs存活率提高，表明RGPCs移植对RGCs及视功能具有保护作用，而视神经损伤后视网膜SDF-1升高对移植细胞的迁移无明显作用。
【关键词】：RSCs RGPCs SDF-1 细胞移植
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R774.6
【目录】：

• 英文缩写词表5-6
• Abstract6-8
• 摘要8-10
• 第一章 前言10-13
• 1.1 视神经损伤导致视功能障碍10
• 1.2 细胞移植治疗视神经损伤仍然面临许多问题10-11
• 1.3 干细胞移植为视神经损伤的治疗带来希望11
• 1.4 视网膜神经节祖细胞移植后的迁徙分化及对视功能保护作用11-12
• 1.5 视神经损伤大鼠 RGPCs 玻璃体腔移植后对视功能保护研究的方法12-13
• 第二章 视网膜神经节祖细胞的获取及鉴定13-22
• 2.1 前言13
• 2.2 视网膜神经节祖细胞的获取及鉴定13-19
• 2.2.1 材料和方法13-15
• 2.2.2 结果15-19
• 2.3 讨论19-20
• 2.4 小结20-22
• 第三章 大鼠视神经损伤后视网膜 SDF-1 及 CXCR4 的表达变化规律22-33
• 3.1 前言22
• 3.2 大鼠视神经损伤后视网膜 SDF-1 及 CXCR4 的表达变化规律22-30
• 3.2.1 材料和方法22-25
• 3.2.2 结果25-30
• 3.3 讨论30-32
• 3.4 小结32-33
• 第四章 视网膜神经节祖细胞移植后迁移分化及对视功能保护作用的初步研究33-47
• 4.1 前言33
• 4.2 视网膜神经节祖细胞移植后迁移分化及对视功能保护作用的初步研究33-44
• 4.2.1 材料和方法33-36
• 4.2.2 结果36-44
• 4.3 讨论44-45
• 4.4 小结45-47
• 全文结论47-48
• 参考文献48-51
• 文献综述 干细胞治疗视网膜疾病新进展51-62
• 参考文献57-62
• 在读硕士学位期间取得的成果62-63
• 致谢63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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3 岑令平;梁嘉健;张铭志;;基质细胞衍生因子-1在视网膜培养中促进节细胞存活的研究[J];汕头大学医学院学报;2012年02期

4 袁源智;袁非;黎蕾;汪洋;童蓓燕;;基质细胞衍生因子-1在Wistar大鼠视网膜上的生理性表达[J];眼科研究;2007年07期

5 苏颖,王继群,王峰,山艳春,陈剑,崔浩,徐锦堂;定量大鼠视神经损伤模型的建立[J];中国病理生理杂志;2005年06期

本文编号：784494