乌司他丁在变应性鼻炎中的治疗作用及其与HO-1关系的研究
发布时间：2017-09-19 16:12
本文关键词：乌司他丁在变应性鼻炎中的治疗作用及其与HO-1关系的研究
更多相关文章： 变应性鼻炎 乌司他丁 血红素加氧酶-1 活性氧自由基 肥大细胞
【摘要】：目的：变应性鼻炎是临床常见慢性疾病，研究表明，变应性鼻炎的发病不仅仅是传统观念所认为的IgE介导的鼻黏膜Ⅰ型变态反应，而且是易感个体接触致敏变应原后导致的包含IgE介导的炎症递质的释放和多种免疫活性细胞、Th1/Th2细胞因子的网络失衡造成的鼻黏膜及粘膜下血管慢性炎症性疾病。变应性鼻炎全球发病率约为10%-25%，我国变应性鼻炎的患病率约为9%-24.6%，而且随着国家工业发展，发病率呈逐年上升趋势，严重影响人们的生活质量。 血红素加氧酶（Heme oxygenase,HO）是一种微粒体酶，是血红素降解的起始酶和限速酶，HO-1为其诱导型，近期研究数据表明，HO-1基因作为一种保护性基因，其过表达有重要的生物学效应比如，抗氧化应激、抗炎、抗恶性细胞增生、调节细胞周期活性以及对Treg细胞的免疫调节作用，HO-1对变应性鼻炎具有保护作用。 目前变应性鼻炎的治疗多采用激素类药物，不良反应多，乌司他丁源于人体，不良反应少，临床上已广泛应用于胰腺炎、休克、全身炎症反应等的治疗，效果显著。乌司他丁能抑制炎症介质过度释放，改善微循环、组织灌注，抑制组织细胞凋亡，同时可稳定细胞膜，抑制蛋白质分解代谢亢进，清除体内氧自由基，抑制IL-6、IL-8的过度生成及ICAM-1的表达等作用，但是该药物在变应性鼻炎中尚未应用，在变应性炎症中的具体作用及机制还有待进一步探讨。 鉴于HO-1与乌司他丁均具有免疫调节和抗炎作用，因此本实验即通过体内体外实验，探讨乌司他丁在变应性鼻炎发病过程中对小鼠及肥大细胞中HO-1蛋白含量表达的影响，并与激素类药物相比较，乌司他丁是否通过诱导HO-1上调，达到治疗作用，为进一步阐述乌司他丁及HO-1在治疗变应性鼻炎中的机制提供理论依据。 方法：40只FVB系SPF级小鼠随机分为空白对照组（con）、AR模型组（OVA）、地塞米松干预组（OVA+Dex）、乌司他丁干预组（OVA+UTI），AR模型组采用10%卵清蛋白（ovalbumin，OVA）进行致敏，建立变应性鼻炎小鼠模型，地塞米松干预组和乌司他丁干预组局部激发前腹腔注射地塞米松及乌司他丁。行为学观察对模型进行评价。末次激发后麻醉、取血，用ELISA法测定血清中IL-4、INF-γ、OVA特异性IgE含量；收集鼻腔灌洗液（Nasal lavage fluid，NLF），用于炎性细胞计数；用Western Blot法测定肺组织HO-1的蛋白含量；鼻组织固定、包埋，行HE染色和免疫组织化学染色，观察鼻组织粘膜形态学改变和HO-1蛋白的表达情况。同时体外培养小鼠肥大细胞分为正常组（con）、炎症模型组（TNF-α组）、地塞米松干预组（TNF-α+Dex）、乌司他丁干预组（TNF-α+UTI），收集上清液检测类胰蛋白酶活力，收集细胞分别行免疫荧光、ROS检测、Westernblot、RT-PCR对乌司他丁在肥大细胞炎症模型中的作用以及HO-1蛋白在各组肥大细胞中的表达情况进行比较，并探讨在肥大细胞中HO-1对乌司他丁是否存在时间及剂量依赖性。 结果： 1乌司他丁可以明显改善变应性鼻炎小鼠鼻部症状。 AR模型组中10只小鼠均建模成功，鼻部出现变应性鼻炎典型的症状，行为学观察叠加记分均5分；与AR组相比，地塞米松干预组、乌司他丁干预组症状明显减轻，叠加记分均5分；对照组没有变应性鼻炎症状。 2乌司他丁对变应性鼻炎小鼠气道粘膜有明显的保护作用 空白对照组鼻黏膜层次分明，无明显炎症改变；AR组鼻黏膜可见不同程度水肿，少量上皮细胞剥脱，杯状细胞体积大，腺体增生，黏膜下嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞浸润。地塞米松干预组及乌司他丁干预组上述改变明显减轻。 3乌司他丁可以明显抑制变应性鼻炎小鼠鼻腔灌洗液中嗜酸性粒细胞数量 AR模型组中嗜酸性粒细胞（EOS）数明显增多，与其他三组相比有统计学差异（P㩳0.05）。地塞米松和乌司他丁干预后，嗜酸性粒细胞明显下降但与空白对照组存在统计学差异（P㩳0.05） 4乌司他丁可以逆转变应性鼻炎小鼠Th1/Th2细胞因子失衡。 AR组小鼠血清中IL-4、OVA特异性IgE、含量明显高于其他三组，差异有统计学意义（P㩳0.05），而空白对照组、地塞米松干预组和乌司他丁干预组间无统计学差异（P0.05）。IFN-γ在AR组小鼠血清中含量明显低于其他三组，存在统计学差异（P㩳0.05），而空白对照组、地塞米松干预组和乌司他丁干预组间无统计学差异（P0.05）。 5乌司他丁可以明显抑制TNF-α刺激后肥大细胞脱颗粒肥大细胞在给予TNF-α刺激后，类胰蛋白酶活力明显增强，明显高于正常组、乌司他丁干预组和地塞米松干预组且存在统计学差异（P㩳0.05），而正常组、乌司他丁干预组和地塞米松干预组之间无明显统计学差异（P0.05）。 6乌司他丁可以明显抑制TNF-α刺激后肥大细胞中ROS的表达 肥大细胞正常组中ROS处于低表达状态，给予TNF-α刺激后，ROS在肥大细胞中的表达明显增加，当给与地塞米松、乌司他丁干预后，ROS在肥大细胞中的表达明显降低，但仍高于正常组。 7乌司他丁可以诱导变应性鼻炎小鼠鼻粘膜、肺组织以及肥大细胞中HO-1蛋白的表达。 空白对照组与其余三组相比，HO-1蛋白表达有有统计学差异（P0.05），而AR模型组与地塞米松干预组、乌司他丁干预组相比无统计学意义（P＞0.05）。 8乌司他丁诱导肥大细胞HO-1蛋白和基因的表达呈时间及剂量依赖性 随着乌司他丁干预的时间增加，HO-1在肥大细胞中的表达逐渐增加，在4小时明显增加。乌司他丁干预4小时，随着乌司他丁浓度的增加，HO-1表达逐渐增加。 结论： 1乌司他丁抑制小鼠气道嗜酸性粒细胞增多，调节Th1/Th2细胞因子失衡等免疫调节作用，与地塞米松相比，同样具有免疫调节作用，但抗炎作用优于地塞米松。 2乌司他丁对肥大细胞炎症模型具有抑制肥大细胞脱颗粒、抗氧化应激作用。 3乌司他丁明显上调治疗组小鼠模型相关组织HO-1蛋白的表达；明显上调肥大细胞HO-1蛋白的表达，其诱导HO-1蛋白及基因表达的作用呈明显时间以及剂量依赖性。 4综上所述，乌司他丁有可能是通过上调HO-1表达而对变应性鼻炎发挥其免疫调节及抗炎作用。
【关键词】：变应性鼻炎 乌司他丁 血红素加氧酶-1 活性氧自由基 肥大细胞
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R765.21
【目录】：
- 摘要4-8
- ABSTRACT8-13
- 前言13
- 材料与方法13-21
- 结果21-25
- 附图25-37
- 附表37-40
- 讨论40-44
- 结论44-45
- 参考文献45-48
- 综述 变应性鼻炎相关细胞因子免疫机制研究进展48-59
- 参考文献53-59
- 致谢59-60
- 个人简历60
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 张罗,韩德民,张波;IL-5在鼻息肉发病机制中的作用[J];国外医学.耳鼻咽喉科学分册;2000年04期
2 雷霞;IL-13和变态反应[J];国外医学(分子生物学分册);2001年01期
3 张罗,韩德民;细胞因子与鼻息肉中嗜酸性粒细胞浸润增多的关系[J];临床耳鼻咽喉科杂志;2001年02期
4 巴罗;杜进涛;刘亚峰;尚婷婷;杨风林;边片;;鼻息肉及变应性鼻炎中IL-17表达与嗜酸粒细胞浸润的意义[J];临床耳鼻咽喉头颈外科杂志;2010年02期
5 吴长有;;Th17细胞:一种新的效应CD4~+T细胞亚群[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年06期
6 蒋龙元;杨炼红;钟娃;何志捷;常建星;黄子通;;乌司他丁对失血性休克大鼠回肠黏膜细胞凋亡的影响[J];中国危重病急救医学;2006年09期
，本文编号：882614
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yank/882614.html
最近更新
教材专著
