醒鼻凝胶剂对变应性鼻炎TSLP依赖型肥大细胞干预机制研究

发布时间：2017-09-24 16:52

  本文关键词：醒鼻凝胶剂对变应性鼻炎TSLP依赖型肥大细胞干预机制研究

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【摘要】：目的：运用现代药理学和分子生物学方法,探讨中药醒鼻凝胶剂对AR模型豚鼠的治疗作用及可能的作用机制,并探究其是否通过抑制鼻黏膜TSLP依赖型MCs的活化起作用,为其进一步开发利用提供实验依据,也为AR发病机制与中医药防治思路提供新的途径。 方法：(1)豚鼠以OVA0.5mg、氢氧化铝30mg加lml生理盐水腹腔注射致敏,鼻腔滴注2%OVA激发复制AR模型。60只豚鼠随机分为正常对照组、模型组、醒鼻凝胶剂低剂量组(6.88mg/kg)、中剂量组(13.76mg/kg)、高剂量组(27.52mg/kg)及阳性药布地奈德组(20μg/kg),每组10只。比较6组AR模型豚鼠的行为学表现。 (2)豚鼠最后一次激发后1h腹腔注射戊巴比妥(50mg/kg)麻醉,取血清、鼻腔灌洗液和鼻粘膜,Lavens SE法定量测定肥大细胞活化标志物类胰蛋白酶含量,ELISA法检测血清中抗体IgE,血清和鼻腔灌洗液中炎性因子IL-5、IL-6、TNF-α、GM-CSF、CCL1、 CXCL8的含量,并对豚鼠病变鼻黏膜进行病理组织学检查。 (3)通过免疫组织化学法检测鼻黏膜中TSLP、TSLP受体(TSLPR)和NF-κB p65蛋白的表达；通过RT-PCR检测鼻黏膜组织中TSLP、TSLPR、NF-κB mRNA的表达。 结果：(1)AR病模行为学指标评分：模型组激发时出现了喷嚏、挠鼻和流涕的典型变应性鼻炎症队,随激发次数的增加,症状加剧,与正常对照组比较,豚鼠的行为学积分有显著差异(P0.01)。而给药组AR症状有明显的缓解。第五次激发时AR行为学评分：正常对照组：0.50±0.85；模型组：5.00±1.33；低剂量组：2.70±0.95；中剂量组：2.70±1.49；高剂量组：2.00±0.82；；布地奈德组：1.60±1.07。各给药组可显著降低豚鼠的AR症状(P0.01)。 (2)鼻黏膜HE染色观察：模型组豚鼠鼻黏膜有不同程度肿胀增厚,血管扩张充血.,杯状细胞增多,伴有大量嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润。而各用药组有不同程度的改善。EOS计数：正常对照组：1.90±0.74；模型组：12.00±1.76；低剂量组：8.70±1.34；中剂量组：3.10±0.88；高剂量组：2.30±0.95；布地奈德组：2.10±0.31。各给药组可显著减少AR豚鼠鼻粘膜的嗜酸性粒细胞数(P0.01)。 (3)与模型组比较,醒鼻凝胶剂中、高剂量组可明显降低血清中类胰蛋白酶、IgE、IL-5、IL-6、TNF-α、GM-CSF含量(P0.01或P0.05),高剂量组可显著降低血清中CXCL-8、CCL-1含量(P0.01或P0.05)。醒鼻凝胶剂中、高剂量组可明显降低鼻腔灌洗液中IL-6、GM-CSF含量(P0.01或P0.05),高剂量组可显著降低鼻腔灌洗液中IL-5、YNF-α含量(P0.01或P0.05)。灌洗液中CXCL-8、CCL-1含量虽有所降低,但无统计学意义(P0.05)。 (4)鼻黏膜免疫组化、PCR结果显示,醒鼻凝胶剂中、高剂量组可显著降低鼻黏膜中TSLP、TSLPR、NF-κB p65蛋白的表达(P0.01)。醒鼻凝胶剂低、中、高剂量组可显著降低鼻黏膜中TSLP、NF-κB mRNA的表达(P0.01)。 结论：通过现代药理学实验证明醒鼻凝胶剂能缓解豚鼠的AR症状,改善鼻黏膜的病理学改变,提示醒鼻凝胶剂对AR有一定的治疗作用,其作用可能与稳定肥大细胞,调控NF-B信号转导,抑制TSLP、TSLPR及炎性因子(IL-5、IL-6等)的释放有关。
【关键词】：中药醒鼻凝胶剂 AR TSLP MCs 机制 实验研究
【学位授予单位】：福建中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R285.5;R765.21
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 缩略词表11-13
• 前言13-17
• 第一章 醒鼻凝胶剂对AR模型豚鼠的治疗作用17-26
• 1 实验材料17-18
• 1.1 实验动物17
• 1.2 实验药品17
• 1.3 实验试剂17
• 1.4 实验仪器17-18
• 2 实验方法18-21
• 2.1 变应性鼻炎豚鼠模型的建立18
• 2.2 给药18
• 2.3 AR病模行为学指标评分18-19
• 2.4 样本采集与处理19
• 2.5 指标检测19-21
• 3 实验结果21-24
• 3.1 AR病模行为学指标评分21-22
• 3.2 血清IgE检测22
• 3.3 肥大细胞活化标志物类胰蛋白酶检测22-23
• 3.4 中药醒鼻凝胶剂对AR豚鼠鼻粘膜组织形态学的影响23-24
• 4 讨论与小结24-26
• 4.1 讨论24-25
• 4.2 小结25-26
• 第二章 醒鼻凝胶剂对TSLP相关炎性因子的抑制作用26-36
• 1 实验材料26-27
• 1.1 实验动物26
• 1.2 实验药品26
• 1.3 实验试剂26-27
• 1.4 实验仪器27
• 2 实验方法27-29
• 2.1 变应性鼻炎豚鼠模型的建立27
• 2.2 给药27
• 2.3 样本采集与处理27
• 2.4 指标检测27-29
• 2.5 统计学方法测定29
• 3 实验结果29-35
• 3.1 血清及鼻腔灌洗液中IL-5检测29-30
• 3.2 血清及鼻腔灌洗液中IL-6检测30-31
• 3.3 血清及鼻腔灌洗液中TNF-α检测31-32
• 3.4 血清及鼻腔灌洗液中GM-CSF检测32-33
• 3.5 血清及鼻腔灌洗液中CCL-1检测33-34
• 3.6 血清及鼻腔灌洗液中CXCL-8检测34-35
• 4 讨论与小结35-36
• 4.1 讨论35
• 4.2 小结35-36
• 第三章 醒鼻凝胶剂对NF-KB、TSLP及其受体蛋白与基因的影响36-46
• 1 实验材料36-38
• 1.1 实验动物36
• 1.2 实验药品36
• 1.3 实验试剂36-37
• 1.4 实验仪器37
• 1.5 主要试剂配制37-38
• 2 实验方法38-42
• 2.1 变应性鼻炎豚鼠模型的建立38
• 2.2 给药38
• 2.3 样本采集与处理38
• 2.4 指标检测38-42
• 3 实验结果42-44
• 3.1 鼻黏膜NF-κB p65蛋白的检测42
• 3.2 鼻枯膜NF-κB mRNA表达的检测42-43
• 3.3 对AR豚鼠鼻黏膜TSLP蛋白表达的影响43
• 3.4 对鼻粘膜组织TSLP mRNA表达的检测43-44
• 3.5 对AR豚鼠鼻黏膜TSLPR蛋白表达的影响44
• 4 讨论与小结44-46
• 4.1 讨论44-45
• 4.2 小结45-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-49
• 附图49-55
• 致谢55-56
• 文献综述56-64
• 参考文献61-64
• 作者简介64

【参考文献】

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本文编号：912356