STGC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响

发布时间：2017-09-25 11:30

  本文关键词：STGC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响

  更多相关文章： STGC3 鼻咽癌 NP69细胞系 iTRAQ 质谱

【摘要】：目的：运用RNAi技术，敲低NP69细胞系中STGC3基因的表达；采用iTRAQ同位素标记及质谱分析，研究STGC3基因表达下调对NP69细胞系蛋白质表达谱的影响，筛选差异表达蛋白质分子，探讨STGC3基因调控的相关分子网络，为阐明鼻咽癌发病的分子机制提供强有力的实验依据。 方法：参照RNAi的设计原则，设计靶向干扰STGC3基因表的发夹样序列（shorthairoin RNAs, shRNA），构建pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3真核表达载体，并对重组质粒进行测序及比对分析；随后将重组质粒用LPTM2000转染NP69细胞，经G418筛选，建立稳定低表达STGC3的pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69细胞系；采用RT-PCR验证pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、 pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三组细胞STGC3基因的mRNA表达水平；分别提取pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三组细胞的总蛋白，进行蛋白酶解，iTRAQ同位素标记，高效液相色谱仪分离，四级杆 静电场轨道阱质谱仪进行质谱分析，获取蛋白质表达丰度信息，对所获取蛋白质表达信息进行数据库搜索分析，筛选差异表达蛋白质分子；运用生物信息学方法，分析差异蛋白质的相互作用。 结果：经测序及Blast比对，证实pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重组质粒构建成功；通过荧光显微镜观察，转染pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重组质粒的NP69细胞可见GFP表达，表明重组质粒转染成功；RT-PCR结果显示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3导入NP69细胞，可有效降低STGC3基因的表达，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69细胞系成功建立；iTRAQ同位素标记及质谱技术，，分析pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69细胞蛋白质表达谱的变化，共鉴定出83个差异表达蛋白，其中上调蛋白45个，下调蛋白38个。生物信息学分析结果表明，这些差异蛋白质分子与蛋白质合成、细胞生长增殖、凋亡及信号转导等功能相关，并初步构建了蛋白质的相互作用网络图。 结论： 1．成功建立pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69细胞系。 2．STGC3基因在NP69细胞的表达降低，可导致NP69细胞的蛋白质表达谱发生改变，本实验鉴定出83个差异蛋白质分子，其中上调蛋白质45个，下调蛋白质38个，其功能涉及蛋白质合成、细胞生长增殖、凋亡及信号转导等。
【关键词】：STGC3 鼻咽癌 NP69细胞系 iTRAQ 质谱
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 技术路线11-12
• 材料与方法12-22
• 实验结果22-42
• 讨论42-50
• 结论50-51
• 参考文献51-60
• 附录一60-62
• 附录二62-63
• 综述63-73
• 参考文献69-73
• 在读期间发表的论文与参与课题73-74
• 致谢74

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 贺修胜,陈主初,田芳,肖志强,贺智敏,关勇军,李峰,何春梅,袁建辉;鼻咽癌中染色体3p21区域一个表达下调的EST的鉴定[J];癌症;2003年01期

2 贺修胜,肖志强,陈主初,赵素萍,朱建华,贺智敏,李友军,田芳,余艳辉;STGC3新基因的克隆及功能初步分析[J];癌症;2004年10期

3 兰炎根;陈舒华;;鼻咽癌蛋白质组学研究进展[J];海南医学;2010年06期

4 邓敏;贺修胜;罗桥;赵帅;曾超;李艳兰;;Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究[J];生物化学与生物物理进展;2006年01期

5 胡波;邱青朝;贺修胜;罗桥;唐国华;龙治峰;廖银花;;雌激素对转STGC3基因CNE2细胞系生长增殖的影响[J];生物化学与生物物理进展;2007年05期

6 李丽;贺修胜;罗桥;张志伟;姚旭炯;陈苏琼;李春成;王莉莉;段蓉;陈主初;;STGC3基因缺失突变对CNE2细胞生长增殖能力的影响[J];生物化学与生物物理进展;2011年03期

7 贾小芳;石妮;熊继先;谢锦云;梁宋平;;鼻咽癌细胞系与永生化的鼻咽上皮细胞系蛋白质表达差异分析(英文)[J];中国生物化学与分子生物学报;2008年01期

本文编号：917042