DC在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验研究

发布时间：2017-09-25 18:34

  本文关键词：DC在高危角膜移植排斥反应中免疫调节机制的实验研究

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【摘要】：目的：培养和诱导大鼠骨髓来源的树突状细胞（dendritic cell，DC），研究未成熟树突状细胞（immature dendritic cell，imDC）对高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用，探讨imDC诱导免疫耐受的机制。 方法：联合应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colonystimulating factor，GM-CSF）和白细胞介素（Interleukin，IL）-4培养、诱导、扩增大量的imDC，肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，，TNF-α）诱导其成为成熟树突状细胞（maturedendritic cell，mDC），结合形态学、细胞表面标志加以鉴定；以60只SD大鼠为受体，30只Wistar大鼠为供体，碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型。受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组和mDC组，每组20只；对照组：术前7d经尾静脉注射PBS液0.1ml；imDC组和mDC组分别于术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC和mDC1×106个。术后每日裂隙灯下观察各组角膜植片存活情况并评分；于术后3d、7d、14d三个时间点，每组随机处死4只受体大鼠，取角膜植片行HE染色；逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测角膜植片Th1型细胞因子（IL-12、IL-15、IL-18）和Th2型细胞因子（IL-4、IL-10）mRNA表达水平；蛋白印迹法（Western blot）分析检测各组大鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3的表达。 结果：通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子，培养、诱导、扩增大量的DC，经倒置相差显微镜、扫射电镜的形态学观察、流式细胞仪进行免疫学表型检测，可证实为不同成熟状态下的DC。角膜移植术后，观察角膜植片存活时间，imDC组植片存活时间与对照组、mDC组比较显著延长，差异具有统计学意义（均为P0.05）；RT-PCR检测：imDC组Th1型细胞因子IL-12、IL-15、IL-18mRNA表达较对照组和mDC组明显降低；Th2型细胞因子IL-4、IL-10mRNA表达明显升高；Western blot检测：各时间点Foxp3表达的相对吸光度值imDC组均明显高于对照组和mDC组，差异有统计学意义（均为P0.05）。 结论：通过联合应用重组大鼠GM-CSF、IL-4、TNF-α三种细胞因子能培养、诱导、扩增出大量的DC；输注体外培养的供体骨髓来源的imDC可以诱导角膜移植免疫耐受，减轻免疫排斥反应，有效延长移植物的存活时间；imDC可能主要通过诱导Th1/Th2细胞偏移和CD4+CD25+调节性T细胞的扩增参与免疫耐受的形成。
【关键词】：未成熟树突状细胞 角膜移植 免疫耐受 Th1/Th2 调节性T细胞
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R779.65
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-23
• 1 材料12-14
• 1.1 实验动物12
• 1.2 主要试剂和实验仪器12-13
• 1.3 相关试剂的配制13-14
• 2 实验方法14-23
• 2.1 大鼠骨髓源DC的分离培养及扩增14-15
• 2.2 DC的鉴定15-16
• 2.3 动物分组及处理16
• 2.4 角膜新生血管模型的建立16
• 2.5 高危角膜移植模型的建立（Wistar→角膜血管化的SD）16-17
• 2.6 术后裂隙灯观察及评分17-18
• 2.7 排除标准18
• 2.8 角膜取材及标本 HE 染色18
• 2.9 RT-PCR检测植片IL-12、IL-15、IL-18、IL-4、IL-10mRNA的表达18-20
• 2.10 Western blot分析检测各组大鼠脾脏Foxp3的表达20-22
• 2.11 统计学处理22-23
• 结果23-30
• 讨论30-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 附图45-52
• 综述52-59
• 参考文献56-59
• 致谢59-60
• 作者简介60-61
• 导师评阅表61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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本文编号：918997