喉癌线粒体DNA D-loop区突变的检测和分析

发布时间：2017-09-26 22:37

  本文关键词：喉癌线粒体DNA D-loop区突变的检测和分析

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【摘要】：目的： 线粒体(mitochondria)是迄今发现的唯一不依赖核基因组进行复制、转录和翻译的细胞器。近年来，线粒体DNA（mtDNA）的改变与人类肿瘤发生的关系备受关注，越来越多的研究证明mtDNA的突变与肿瘤的发生关系密切，尤以D-loop区的突变率最高。mtDNA D-loop区位于16024～576bp之间，占全部mtDNA的6％左右，主要负责调控mtDNA的转录和复制。本研究中我们通过检测与分析喉癌组织中mtDNAD-loop区突变情况，进而阐述mtDNA D-loop区的突变与喉癌发生的关系。 方法： 以吉林大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科手术治疗的40名喉癌患者为研究对象，年龄在45岁-75岁之间，其中男性28例，女性12例，术中切取病人的肿瘤组织及相应的癌旁组织，总计80例标本，置于负80度冰柜冻存备用，通过提取组织标本的DNA，利用PCR扩增、产物纯化和直接测序等技术，，运用美国NCBI数据库的基因序列分析软件，将肿瘤组织mtDNA D-loop区序列和癌旁组织的序列与目前公认的剑桥标准序列进行比对(BLAST)，找出mtDNA D-loop区的高发突变位点及高频率的多态性改变，总结并分析mtDNA D-loop区突变与喉癌发生的关系。 结果： 在40例喉癌患者中，有18例发生突变，突变率是45％，突变多集中在HVⅠ区，突变的类型主要表现为单个碱基的替换或单个碱基的插入和缺失，发现20个微卫星不稳定现象，主要集中在D310区，共发现多态性改变102个，单个标本最多发现多态性改变位点8个。 结论： 喉癌组织mtDNA突变率明显高于正常组织，喉癌mtDNA D-loop区具有高度的多态性和突变性，对mtDNA D-loop区突变的检测有望应用于肿瘤的早期诊断。
【关键词】：喉癌 线粒体DNA D-loop 多态性
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.65
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 文献综述13-19
• 2.1 综述一线粒体 DNA 及 D-LOOP 区的概述13-15
• 2.2 综述二线粒体 DNA D-LOOP 区突变与肿瘤的关系的研究进展15-17
• 2.3 综述三线粒体 DNA D-LOOP 区突变对肿瘤细胞表型的影响17-19
• 第3章 资料与方法19-27
• 3.1 材料19-20
• 3.1.1 喉癌组织及癌旁组织标本19
• 3.1.2 试剂及来源19
• 3.1.3 实验所需的主要仪器及设备19-20
• 3.2 实验方法20-22
• 3.2.1 喉癌组织线粒体 DNA 的提取20-21
• 3.2.2 引物的设计与合成21
• 3.2.3 PCR 反应21
• 3.2.4 PCR 产物的电泳21
• 3.2.5 基因测序21-22
• 3.3 结果22-27
• 3.3.1 mtDNA PCR 产物扩增结果22
• 3.3.2 测序结果及分析22-27
• 第4章 讨论27-30
• 第5章 结论30-31
• 参考文献31-36
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果36-37
• 致谢37

【参考文献】

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1 陈道桢,薛文群,杨幼易,耿金花,陆以农,陆肖玮,王峻峰,印永祥,孟西娜;宫颈癌线粒体DNA D-Loop区基因突变的研究[J];肿瘤;2005年04期

本文编号：926143