沉默GLRX3基因对鼻咽癌细胞的生物学影响

发布时间：2017-09-30 11:35

  本文关键词：沉默GLRX3基因对鼻咽癌细胞的生物学影响

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【摘要】：目的：验证GLRX3(glutaredoxin3)基因在鼻咽癌中的转录表达水平,利用RNAi技术建立稳定沉默GLRX3基因的鼻咽癌细胞株HONE1,探索GLRX3基因在鼻咽癌细胞中的恶性生物学功能,为鼻咽癌的发病机制及治疗提供理论依据。 方法：1、采用Real time PCR技术检测鼻咽癌细胞株HONE1、HNE1、 CNE1、CNE2、5-8F、TW03及正常鼻咽上皮细胞株NP69,鼻咽癌活检组织及正常鼻咽上皮组织中GLRX3基因的转录表达水平,探讨GLRX3基因在鼻咽癌中的转录表达改变情况。筛选高表达GLRX3基因的鼻咽癌细胞株,为下一步基因沉默实验提供研究对象。2、采用RNAi技术构建靶向GLRX3基因的逆转录病毒shRNA干扰载体,将其转染入病毒包装细胞PA317中,收集病毒液感染鼻咽癌细胞株HONE1, puromycin筛选建立稳定沉默GLRX3基因的HONE1细胞株。采用Real time PCR验证HONE1细胞中GLRX3的转录水平,并通过MTT比色实验、克隆形成实验和划痕实验检测沉默GLRX3后鼻咽癌细胞的增殖能力、克隆形成能力及迁移运动能力,以评价沉默GLRX3基因后鼻咽癌细胞肿瘤生物学行为的改变。 结果：1、与正常鼻咽上皮组织及正常鼻咽上皮细胞株NP69相比,GLRX3基因在鼻咽癌活检组织及鼻咽癌细胞株中表达上调；HONE1细胞在6个鼻咽癌细胞株中的GLRX3转录表达水平最高,可以作为下一步基因沉默实验的研究对象。2、成功构建4个GLRX3shRNA-pBINNS2干扰载体均可抑制GLRX3基因的转录表达；MTT比色实验、平板克隆形成实验及划痕实验的结果提示沉默GLRX3基因可抑制HONE1细胞的增殖、克隆形成和迁移运动。 结论：1、GLRX3基因在鼻咽癌细胞和原发肿瘤组织中表达上调。2、沉默GLRX3基因可抑制鼻咽癌细胞的恶性生物学行为。3、GLRX3基因可能是鼻咽癌的候选癌基因。
【关键词】：鼻咽癌 GLRX3 RNA干扰 shRNA 逆转录病毒载体
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.63
【目录】：

• 目录3-5
• 缩略词表5-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-14
• 第一部分 GLRX3基因在鼻咽癌中转录表达的研究14-25
• 1 材料和方法14-20
• 2 结果20-22
• 3 讨论22-24
• 4 小结24-25
• 第二部分 沉默GLRX3基因对鼻咽癌细胞增殖与侵袭的影响25-46
• 1 材料和方法25-35
• 2 结果35-41
• 3 讨论41-45
• 4 小结45-46
• 全文总结46-47
• 参考文献47-53
• 综述53-66
• 参考文献61-66
• 致谢66

【参考文献】

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本文编号：948013