左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫外侧膝状体神经细胞的影响

发布时间：2017-10-05 03:26

  本文关键词：左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫外侧膝状体神经细胞的影响

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【摘要】：目的：弱视是眼科临床常见的儿童眼病,是婴幼儿时期,由于各种原因如知觉、运动、传导及视中枢等原因未能接受适宜的视刺激,使视觉发育受到影响而发生的视觉功能减退的状态,主要表现为视力低下及双眼单视功能障碍。近年来,左旋多巴(L-dopa)作为治疗弱视的药物,在国内外的文献报道其疗效已获得了一定的认可。但L-dopa在人体内代谢的过程中存在外周副作用较大、药效波动范围较大、耐受性差等缺点。鉴于前期实验的基础,本实验组将左旋多巴通过结构改造,改造成其衍生物左旋多巴甲酯(LDME)。本研究的目的是通过给予不同剂量的左旋多巴甲酯,观察其对剥夺性弱视猫模型的影响,对左旋多巴甲酯的作用机制进行探讨,并评价其治疗弱视的药效学作用。 方法：初生家养幼猫(2-4周龄)30只随机分为6组(每组5只)：左旋多巴甲酯高剂量组(LDMEH)、中剂量组(LDMEM)、低剂量组(LDMEL)、阳性药左旋多巴对照组、正常对照组(NC)、弱视模型对照组(AC)。除了正常组外,于4周龄时参照Hubel经典实验方法对各组幼猫进行麻醉后的左眼单纯上下睑缝合建立剥夺性弱视。12周龄经图形视觉诱发电位(P-VEP)确定形成弱视后,灌胃给与左旋多巴甲酯20,40,80mg·kg-1，阳性对照组给与左旋多巴40mg·kg-1,正常对照组及模型组均给与等量生理盐水。每天一次持续30天。 1、应用图形视觉诱发电位(P-VEP)研究左旋多巴甲酯对各组猫视皮质电生理的影响；2、进行HE染色和透射电镜观察左旋多巴甲酯给药组猫外侧膝状体形态学的变化；3、TUNEL检测法观察外侧膝状体神经细胞的凋亡情况；4、免疫组织化学法检测外侧膝状体中神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达；5、Western-blot法检测视外侧膝状体中NGF、c-Fos蛋白的表达。6、相对定量荧光PCR (Real time-PCR)法检测外侧膝状体中c-fos mRNA的表达。 结果： 1、剥夺性弱视的视觉电生理研究 与正常对照组同侧猫眼相比,剥夺性弱视模型组中剥夺眼的P-VEP波幅值明显降低及P100值潜时延长,差异具有统计学意义(P0.01)。与剥夺性弱视模型组相比,各药物治疗组中剥夺眼的P-VEP振幅有不同程度的升高且P100值潜时减少,其中左旋多巴甲酯高剂量组最为明显,差异有统计学意义(P0.05)。提示左旋多巴甲酯高剂量组通过提高P-VEP振幅和减少P100值潜时,使剥夺性弱视猫弱视眼的信号传导功能得到改善。 2、外侧膝状体的形态学研究 模型组外侧膝状体的核浆比例降低和核移位,有些神经元肿胀或变形,同时有胶质细胞增生。大量细胞变性死亡；细胞核核膜模糊,核内染色体边集；粗面内质网扩张,线粒体数量减少,嵴不清晰。而经左旋多巴和左旋多巴甲酯治疗后,各组外侧膝状体神经细胞变性死亡数目减少,神经细胞数量增多,少见神经元变形或肿胀现象,胶质细胞少量出现,核膜较模型组清晰,线粒体数目增加,嵴清晰,粗面内质网扩张情况得到缓解。 3、左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫模型外侧膝状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的影响 与剥夺性弱视模型组相比,左旋多巴对照组、左旋多巴甲酯高、中、低剂量组外侧膝状体中各层的内源性nNOS免疫阳性细胞数量均有所增加,差异有统计学意义(P0.05)。与左旋多巴阳性组相比,高剂量组中的内源性nNOS阳性细胞数多于左旋多巴阳性组,低于正常对照组,但两组未见有统计学差异(P0.05)。 4、左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫模型外侧膝状体细胞凋亡表达的影响 TUNEL染色细胞计数时发现,在外侧膝状体中的TUNEL阳性细胞在相同时期内表现出不同剂量下的左旋多巴甲酯治疗效果。模型对照组中外侧膝状体细胞凋亡结果显示与正常对照组(很少的细胞凋亡)比较神经细胞内发生了严重的DNA断裂情况。治疗后,给药各组的凋亡细胞数量与模型对照组比较均有不同程度的减少。而左旋多巴甲酯高剂量组的逆转细胞凋亡水平的作用最为明显(P0.05)。正常组和模型对照组左侧外膝体细胞凋亡水平分别为6.08%和37.25%(A层),两数值间的差异有统计学意义(P0.05)。治疗30天后,左旋多巴甲酯对左侧外侧膝状神经细胞发挥了一定的治疗作用(P0.05)。 5、左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫模型外侧膝状体神经生长因子(NGF)的影响 Western blot分析显示,剥夺性弱视模型组外侧膝状体中的NGF蛋白的表达明显少于正常组(P0.05)。与剥夺性弱视模型组相比,左旋多巴组与左旋多巴甲酯低、中、高给药治疗组外侧膝状体中NGF蛋白的表达有所增加,其中左旋多巴甲酯高剂量NGF蛋白表达水平最高(P0.05)。 6、左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫模型外侧膝状体中c-fos基因的影响 Western blot分析显示,剥夺性弱视模型组外侧膝状体中的c-fos蛋白的表达明显少于正常组(P0.05)。与剥夺性弱视模型组相比,各给药治疗组中的c-fos蛋白的表达逐渐增加。 7、左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫模型外侧膝状体c-fos mRNA表达的影响 RT-PCR结果显示,与正常对照组相比较,剥夺性弱视模型组外侧膝状体c-fos mRNA表达水平明显下调,差异有显著性(P0.05)。与弱视模型组相比,各给药治疗组外侧膝状体c-fos mRNA表达水平有所上调,差异有统计学意义(P0.05),而其中左旋多巴甲酯高剂量组表达最为明显(P0.05)。 结论： 1、左旋多巴甲酯能通过提高剥夺性弱视猫的P1oo波幅值减少P1oo波峰潜时和提升P100波幅值,使剥夺性弱视猫的视通路的信号传导得到改善,从而恢复视觉功能。 2、给予左旋多巴甲酯进行治疗后,剥夺弱视猫的外侧膝状体中的神经元修复能力和再生能力有所提高,神经细胞变性死亡数目减少,神经细胞数量增多。,少见神经元变形或肿胀现象,胶质细胞少量出现,核膜较模型组清晰,线粒体数目增加,嵴清晰,粗面内质网扩张情况得到缓解。 3、左旋多巴甲酯对弱视猫外侧膝状体的神经细胞有效地进行抑制凋亡进程。 4、左旋多巴甲酯可使剥夺性弱视猫外侧膝状体神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的表达水平上调。 5、左旋多巴甲酯可使剥夺性弱视猫外侧膝状体经细胞NGF的蛋白表达水平提高,这与改善P-VEP中各波值的效果是一致的。 6、左旋多巴甲酯可明显增加剥夺性弱视猫外侧膝状体c-Fos蛋白的表达。 7、左旋多巴甲酯可使剥夺性弱视猫外侧膝状体c-fos mRNA水平的上调。 8、左旋多巴甲酯可使剥夺性弱视猫外侧膝状体的功能得到恢复,可作为治疗弱视的潜在药物。其治疗的机制可能与其能调控外侧膝状体NGF、 nNOS、c-fos的表达、提高神经元的修复和再生能力、抑制细胞凋亡的有关。
【关键词】：剥夺性弱视 猫 外侧膝状体 NGF nNOS c-fos
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R965;R777.44
【目录】：

• 本文主要中英文对照说明5-6
• 摘要6-11
• ABSTRACT11-17
• 前言17-19
• 第一部分 左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫视觉诱发电位的研究19-26
• 1 材料与方法19-20
• 2 结果20-22
• 3 讨论22-24
• 参考文献24-26
• 第二部分 左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫外侧膝状体的组织学研究26-31
• 1 材料与方法26-27
• 2 实验结果27-28
• 3 讨论28-29
• 参考文献29-31
• 第三部分 左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫外侧膝状体一氧化氮合酶(nNOS)的影响31-38
• 1 材料与方法31-32
• 2 结果32-35
• 3 讨论35-36
• 参考文献36-38
• 第四部分 左旋多巴甲酯对剥夺性弱视猫外侧膝状体神经细胞凋亡的影响38-45
• 1 材料与方法38-39
• 2 结果39-42
• 3 讨论42-43
• 参考文献43-45
• 第五部分 左旋多巴甲酯剥对夺性弱视猫外侧膝状体神经因子NGF的影响45-53
• 1 材料与方法45-47
• 2 结果47-48
• 3 讨论48-50
• 参考文献50-53
• 第六部分 左旋多巴甲酯剥对夺性弱视猫外侧膝状体c-Fos表达的影响53-60
• 1 材料与方法53-55
• 2 结果55-56
• 3 讨论56-58
• 参考文献58-60
• 第七部分 左旋多巴甲酯剥对夺性弱视猫外侧膝状体c-fos mRNA表达的影响60-67
• 1 材料与方法60-63
• 2 结果63-64
• 3 讨论64-65
• 参考文献65-67
• 综述67-72
• 参考文献72-77
• 攻读硕士学位期间发表的论文77-78
• 攻读硕士学位期间获得的科研项目78-79
• 致谢79

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周清;陈剑;刘珏;徐锦堂;王彦平;赵松滨;;视觉发育可塑性关键期后弱视大鼠视皮质c-fos的表达[J];广东医学;2007年10期

2 赵辉,尹志勇,王正国;视觉发育可塑性的电生理及分子生物学研究进展[J];国际眼科杂志;2004年06期

3 张庆慧;;北京市大兴区学龄前儿童视力及弱视调查[J];国际眼科杂志;2006年06期

4 李昂;曾军;;弱视治疗新进展[J];国际眼科杂志;2007年01期

5 马春霞;潘爱珠;于敬妮;王煊;杨新光;唐乐;韩露琳;;弱视患者P-VEP,P-ERG的变化[J];国际眼科杂志;2007年04期

6 陈为;孙强;张聪;;难治性弱视服用思利巴临床疗效观察[J];国际眼科杂志;2009年07期

7 韩冬;吴晋晖;闫飞虎;;弱视治疗研究新进展[J];国际眼科杂志;2009年12期

8 卢静,戴体俊,曾因明;c-fos基因表达的相关机制和意义[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;2004年05期

9 朱永仁;刘志明;;细胞凋亡的研究进展[J];贵州畜牧兽医;2008年01期

10 邵立功;;弱视模型视觉神经系统的神经生长因子表达特征研究[J];海军总医院学报;2006年04期

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本文编号：974512