新型抗菌肽对口腔细菌及其生物膜的抑制作用和应用研究

发布时间：2017-10-20 23:06

  本文关键词：新型抗菌肽对口腔细菌及其生物膜的抑制作用和应用研究

  更多相关文章： 抗菌多肽 变形链球菌 龋齿 牙周病 生物膜

【摘要】：当今世界龋齿和牙周病已经成为威胁人类口腔健康的一大杀手。而研究发现口腔微生态的失衡会导致变形链球菌等口腔致病菌的过度生长,进而引发各种口腔疾病的出现。另外这些条件致病菌,如变形链球菌、远缘链球菌、牙龈卟啉单胞菌等在自身的代谢过程中会分泌胞外多糖等物质,在牙齿表面形成一种薄膜,随后其他细菌附着或进入其中,生物膜和细菌不断加厚增多,形成牙菌斑。而牙菌斑被称为口腔疾病的“始动因子”。所以我们想要预防和治疗口腔疾病,不仅要杀灭口腔中的致病菌,而且还要可以抑制牙菌斑生物膜的形成及发展。我们通过测定最低抑菌浓度(MIC),检测了来源于蝎子毒液的抗菌肽ZXR-2对口腔细菌的生物活性。实验结果显示ZXR-2具有广谱的抗菌活性,既能作用于革兰氏阳性细菌,又可以杀死革兰氏阴性细菌,特别是对大肠杆菌的MIC值为4μM,比青霉素低约90倍。我们还通过时间-致死曲线观察了ZXR-2对变形链球菌、远缘链球菌、牙龈卟啉单胞菌在各自最低抑制浓度四倍的状态下的致死速度,发现ZXR-2可以快速有效的将这些细菌杀灭,四倍MIC值下5 min内可以杀死大部分测试菌种。接着使用扫描电镜观察了ZXR-2作用下细菌细胞膜的凹陷破碎等情况。ZXR-2对哺乳动物红细胞具有较低的溶血特性,8-16μM浓度下作用3 h,约有15%左右的红细胞溶血。我们在变形链球菌初期形成生物膜的过程中加入一系列浓度的ZXR-2,研究ZXR-2对其形成过程产生的影响。同时也探索了ZXR-2对变形链球菌成熟生物膜发展过程的影响。结果显示ZXR-2能够有效的抑制变形链球菌初期生物膜的形成,同时对其后期的发展也有一定的抑制作用。综合比较ZXR-2的抗菌活性、杀菌速度、溶血性及对变形链球菌初后期生物膜发展的抑制作用,我们觉得ZXR-2具有一定的市场应用前景,有希望出现在预防及治疗口腔疾病的各种产品中。
【关键词】：抗菌多肽 变形链球菌 龋齿 牙周病 生物膜
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 第一章 绪论15-27
• 1.1 口腔微生态15-16
• 1.2 口腔中常见的细菌感染疾病16
• 1.3 菌斑生物膜16-18
• 1.3.1 菌斑生物膜的形成过程16-17
• 1.3.2 菌斑生物膜结构17-18
• 1.3.3 菌斑生物膜研究进展18
• 1.4 抗菌肽18-26
• 1.4.1 抗菌肽的分类19-20
• 1.4.2 抗菌肽的作用机制20-23
• 1.4.2.1 与细菌细胞壁的作用20
• 1.4.2.2 与细菌细胞膜的作用20-22
• 1.4.2.3 与细菌细胞内靶目标的作用22-23
• 1.4.3 抗菌肽的合成方法23-24
• 1.4.3.1 生物合成法23
• 1.4.3.2 化学合成法23-24
• 1.4.4 抗菌肽的细菌活性分析24
• 1.4.5 抗菌肽的作用机理24-25
• 1.4.6 抗菌肽作用于牙菌斑生物膜25
• 1.4.7 抗菌肽的细胞溶血性作用研究25-26
• 1.5 论文选题意义及目的26-27
• 第二章 实验部分27-41
• 2.1 实验仪器及材料27-29
• 2.1.1 实验仪器27-28
• 2.1.2 实验药品28-29
• 2.2 实验方法29-41
• 2.2.1 菌种的培养29-30
• 2.2.2 多肽的合成和纯化30-33
• 2.2.2.1 多肽合成步骤30-31
• 2.2.2.2 多肽从树脂上切除31
• 2.2.2.3 鉴定纯化抗菌肽31-33
• 2.2.3 最低抑菌浓度实验33
• 2.2.4 时间-致死曲线33-34
• 2.2.5 杀菌机制分析34-35
• 2.2.6 抗菌肽对变形链球菌的粘附性分析35
• 2.2.7 结晶紫定量法检测抗菌肽对变形链球菌生物膜的影响35-36
• 2.2.7.1 对变形链球菌生物膜形成过程的影响35-36
• 2.2.7.2 对变形链球菌成熟生物膜的影响36
• 2.2.8 变形链球菌成熟生物膜的图像观察36-37
• 2.2.9 溶血性分析37
• 2.2.10 漱口水中的应用37-41
• 2.2.10.1 简易漱口水配制37-39
• 2.2.10.2 漱口水效果检测39-41
• 第三章 实验结果与讨论41-63
• 3.1 抗菌肽的合成与纯化41-45
• 3.1.1 抗菌肽的合成41
• 3.1.2 抗菌肽的分析纯化41-42
• 3.1.3 抗菌肽分子量的鉴定42-44
• 3.1.4 抗菌肽的大量制备44
• 3.1.5 抗菌肽制备产物的纯度分析44-45
• 3.2 抗菌肽的抗菌活性分析45-49
• 3.2.1 最低抑菌浓度实验45-48
• 3.2.2 时间-致死曲线48-49
• 3.3 抗菌肽的作用机制49-50
• 3.4 抗菌肽对变形链球菌生物膜的影响50-57
• 3.4.1 抗菌肽对变形链球菌粘附性影响50-51
• 3.4.2 抗菌肽对变形链球菌生物膜形成过程的影响51-53
• 3.4.3 抗菌肽对变形链球菌成熟生物膜的影响53-57
• 3.4.3.1 结晶紫定量法53-55
• 3.4.3.2 变形链球菌生物膜图像观察55-57
• 3.5 抗菌肽的溶血性分析57-58
• 3.6 简易漱口水58-63
• 3.6.1 抑菌圈实验结果58-60
• 3.6.2 企业标准检测60-63
• 第四章 结论与展望63-65
• 参考文献65-69
• 附录69-71
• 致谢71-73
• 研究成果及发表论文73-75
• 作者和导师介绍75-76
• 附件76-77

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本文编号：1069875