eEF2K抑制剂的高通量药物筛选模型的建立及应用

发布时间：2017-10-21 12:03

  本文关键词：eEF2K抑制剂的高通量药物筛选模型的建立及应用

  更多相关文章： 真核生物延伸因子2激酶 多肽链延伸 真核生物延伸因子2激酶抑制剂 高通量筛选

【摘要】：真核生物延伸因子2激酶(eukaryotic elongation factor 2 kinase,eEF2K)是由人类基因组eEF2K基因编码的一个激酶,是一个高度保守的激酶,与典型的蛋白激酶在序列上同源性小,它归属于一个名叫"α-激酶"的非典型蛋白激酶小家族。研究显示,eEF2K在一定的代谢压力条件下能磷酸化并抑制真核生物延伸因子2(eukaryotic elongation factor 2,eEF2)的功能,进而抑制细胞中蛋白质合成过程中多肽链的延伸,使细胞中能量和氨基酸的消耗减少,帮助细胞度过营养缺乏等不利条件。在很多癌细胞中eEF2K都有很高的活性。同时eEF2K的活性依赖于钙离子和钙调蛋白,它还有细胞的保护作用使之成为癌症等疾病药物治疗的潜在靶点。本文旨在运用高通量药物筛选的方法来发现eEF2K的小分子抑制剂及其药用前景。在文中我们建立并优化了一个靶向eEF2K小分子抑制剂的高通量筛选方法。我们选用DMSO作为阴性对照,化合物A484954作为阳性对照,检测最终反应体系中的冷光值来反应化合物抑制率。如果化合物能抑制反应体系中eEF2K的活性,则与阳性对照化合物反应孔的冷光值相比,其最终检测到的冷光值会降低。由此计算我们筛选过程中化合物的抑制率。最终我们对56000个小分子化合物进行了大规模的随机筛选,得到了9个具有剂量依赖性反应的活性化合物,选出了5个IC50值小于50μM的化合物进行了体外细胞水平的功能性验证,进一步的研究正在进行中。我们的该项研究发现为靶向eEF2K的癌症等疾病的药物治疗奠定了良好的基础。
【关键词】：真核生物延伸因子2激酶 多肽链延伸 真核生物延伸因子2激酶抑制剂 高通量筛选
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R94
【目录】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 第1章 引言6-14
• 1.1 背景概述6-10
• 1.2 国内外本学科领域的发展现状与趋势10-14
• 第2章 实验材料和方法的建立14-23
• 2.1 高通量药物筛选的简介14-15
• 2.2 实验材料15-16
• 2.3 靶向eEF2K的小分子抑制剂高通量筛选方法的建立16-23
• 第3章 高通量筛选23-26
• 3.1 文献中已经报道的eEF2K抑制剂23-25
• 3.2 eEF2K抑制剂的高通量筛选25-26
• 第4章 数据分析26-27
• 第5章 实验结果27-32
• 5.1 高通量筛选结果27-29
• 5.2 细胞实验结果29-32
• 第6章 结论与展望32-34
• 致谢34-35
• 参考文献35-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 论文综述 癌症治疗的新靶点——eEF2K39-52
• 参考文献50-52

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本文编号：1073218