紫杉醇白蛋白纳米粒质量标准、药代动力学及组织分布研究

发布时间：2017-10-22 22:24

  本文关键词：紫杉醇白蛋白纳米粒质量标准、药代动力学及组织分布研究

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【摘要】：紫杉醇是一种从西部红豆杉的树皮中提取的天然疏水性二萜类物质,因能够促进微管蛋白聚合,导致细胞分裂停留在有丝分裂的G2-M期交界处,使细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。紫杉醇具有广谱的抗肿瘤作用,但由于难溶于水,传统的紫杉醇注射液需要用聚氧乙烯蓖麻油和乙醇溶解,容易产生超敏反应,限制了紫杉醇的临床应用。而紫杉醇白蛋白纳米粒是紫杉醇与人血白蛋白结合的水溶性药物,具有较好的生物相容性,能够减少毒性反应,具有更好的安全性,因此本文针对本实验室自制的紫杉醇白蛋白纳米粒开展了质量标准及体内评价研究。本文首先将实验室自制的紫杉醇白蛋白纳米粒,依照中国药典(2010版)及进口药品注册标准进行质量标准的研究。结果显示紫杉醇白蛋白纳米粒PH为6.51±0.05,平均粒径为128.24±14.67 nm,分别对白蛋白及紫杉醇含量测定的方法进行了方法学验证实验,精密度(RSD)分别为0.10%和0.24%,重现性(RSD)分别为0.29%和1.70%,加样回收率分别为97.60%和98.81%,稳定性(RSD)分别为0.36%和1.17%,含量测定结果为紫杉醇与白蛋白药量比约为1:9。为了对大鼠血浆及组织中的浓度较低的紫杉醇进行定量分析,本文建立了一种快速、灵敏、简单的UPLC-MS/MS方法。选用的色谱柱为Waters BEH-C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流动相为乙腈和水(0.1%甲酸)进行梯度洗脱,电喷雾正离子模式(ESI+)下进行多重反应监测(MRM),得到紫杉醇定量离子对为m/z 854.66→286.22,内标炔诺酮定量离子对为m/z 299.33→109.05。采用蛋白沉淀结合液液萃取的方法对血浆及组织样品预处理,蛋白沉淀剂为乙腈,萃取剂为三氯甲烷。对UPLC-MS/MS方法进行了血浆方法学验证实验,结果表明紫杉醇的血浆标准曲线的线性范围为3.00~500.00 ng/m L(R20.99),最低定量限为3.00 ng/m L,回收率为81.06±6.52%,基质效应为105.51±6.67%,日内、日间准确度(RE)范围为-3.98~3.92%,精密度(RSD)范围为3.56~7.26%,稳定性(RSD)范围为2.65~8.68%,均符合SDFA的规定。药代动力学实验结果显示白蛋白纳米粒给药组血药浓度(Cmax)较紫杉醇原料药组低,药时曲线下面积(AUC0-∞)、半衰期(T1/2)、平均滞留时间(MRT)分别为紫杉醇原料药组的2.13~2.85、1.36~2.45倍、2.46~3.33倍,血浆清除率(CL)是紫杉醇原料药组的35.41%~47.95%。对UPLC-MS/MS方法进行了大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑组织的方法学验证试验,方法学验证结果表明紫杉醇在各个组织标准曲线的线性范围为3.00~500.00 ng/m L(R20.99),最低定量限达3.00 ng/m L,回收率均大于80%,基质效应在100%左右,日内、日间精密度(RSD)范围为2.08~8.24%,准确度(RE)范围为-4.80~3.62%,稳定性(RSD)范围为0.51~10.25%,均符合SDFA的规定。组织分布结果显示在给药初期紫杉醇白蛋白纳米粒给药组的紫杉醇在肝、脾、肺、肾组织含量明显高于紫杉醇原料药组,倾向于向血流量较大的组织分布,随后浓度下降较快,10 h之后下降缓慢,能够在组织中维持一定的浓度。实验室自制的紫杉醇白蛋白纳米粒质量标准符合药典及进口药品注册标准的规定,药代动力学结果表明紫杉醇白蛋白纳米粒制剂能在较长的时间内保持一定的血药浓度,显示出一定的缓释性,组织分布结果表明紫杉醇白蛋白纳米粒给药组相较于紫杉醇原料药给药组,能向组织中分布更多的药物,因而紫杉醇白蛋白纳米粒表现出了更大优势。
【关键词】：紫杉醇白蛋白纳米粒 质量标准 UPLC9-9MS9/9MS9 药代动力学 组织分布
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R927;R965
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 绪论12-20
• 1.1 紫杉醇概述12
• 1.2 紫杉醇的作用机制12-13
• 1.3 紫杉醇类药物制剂研发现状13-15
• 1.3.1 传统紫杉醇药物13
• 1.3.2 紫杉醇新型药物制剂13-15
• 1.4 生物样品中紫杉醇含量的测定15-17
• 1.4.1 高效液相色谱法16
• 1.4.2 液相色谱质谱联用技术16-17
• 1.5 立题依据和研究内容17-20
• 第二章 紫杉醇白蛋白纳米粒质量标准的研究20-40
• 2.1 引言20
• 2.2 实验20-25
• 2.2.1 仪器与药品20-21
• 2.2.2 性状21
• 2.2.3 鉴别21
• 2.2.4 检查21-22
• 2.2.5 人血白蛋白含量测定22-23
• 2.2.6 紫杉醇含量测定23-25
• 2.3 结果与讨论25-38
• 2.3.1 性状25
• 2.3.2 鉴别25-27
• 2.3.3 检查27-30
• 2.3.4 人血白蛋白含量的测定30-34
• 2.3.5 紫杉醇含量的测定34-38
• 2.4 本章小结38-40
• 第三章 UPLC-MS/MS定量分析紫杉醇方法的建立40-48
• 3.1 引言40
• 3.2 实验40-43
• 3.2.1 仪器与药品40-41
• 3.2.2 溶液的配制41
• 3.2.3 质谱条件的优化41
• 3.2.4 液相条件的优化41-42
• 3.2.5 血浆样品处理方法的选择42-43
• 3.3 结果与讨论43-47
• 3.3.1 质谱条件的优化43-46
• 3.3.2 液相条件的优化46
• 3.3.3 血浆样品的处理方法46-47
• 3.4 本章小结47-48
• 第四章 紫杉醇白蛋白纳米粒药代动力学的研究48-62
• 4.1 引言48
• 4.2 实验48-53
• 4.2.1 仪器与药品48-49
• 4.2.2 溶液配制49
• 4.2.3 UPLC-MS/MS条件49-50
• 4.2.4 血浆样品的处理50
• 4.2.5 血浆标准曲线样品及血浆质控样品的制备50
• 4.2.6 分析方法的确证50-52
• 4.2.7 紫杉醇白蛋白纳米粒及紫杉醇原料药在大鼠体内的药代动力学52-53
• 4.3 结果与讨论53-61
• 4.3.1 分析方法的确证53-60
• 4.3.2 紫杉醇白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学研究60-61
• 4.4 本章小结61-62
• 第五章 紫杉醇白蛋白纳米粒组织分布的研究62-80
• 5.1 引言62
• 5.2 实验62-66
• 5.2.1 仪器与药品62-63
• 5.2.2 溶液的配制63
• 5.2.3 UPLC-MS/MS条件63
• 5.2.4 组织匀浆液的制备63
• 5.2.5 组织样品的处理63-64
• 5.2.6 组织样品分析方法的确证64-65
• 5.2.7 紫杉醇在大鼠体内组织分布的研究65-66
• 5.3 结果与讨论66-78
• 5.3.1 组织样品分析方法的确证66-76
• 5.3.2 紫杉醇在大鼠体内组织分布结果76-78
• 5.4 本章小结78-80
• 第六章 结论与展望80-82
• 6.1 结论80
• 6.2 展望80-82
• 参考文献82-88
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果88-90
• 致谢90

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