阿司匹林对小鼠前成骨细胞增殖、分化、矿化的影响及可能作用机制

发布时间：2017-10-24 06:20

  本文关键词：阿司匹林对小鼠前成骨细胞增殖、分化、矿化的影响及可能作用机制

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【摘要】：背景:骨质疏松症是以骨密度减少、骨显微结构改变、骨骼脆性增加、易发生骨折为特征的慢性疾病,以绝经后女性及老年男性发病率较高,至今为止关于骨质疏松症的发病机制仍不甚清楚。阿司匹林作为解热镇痛药及抗血小板药物广泛用于临床,近年来多项研究提示阿司匹林具有抗骨质疏松作用,然而具体机制尚不明确。OPG/RANKL/RANK信号通路因其在成骨细胞-破骨细胞偶联中处于重要地位,被认为是骨质疏松发病过程中的重要环节。目的:研究阿司匹林对小鼠前成骨细胞MC3T3的增殖、分化及矿化的影响,探讨阿司匹林通过OPG/RANKL/RANK信号通路影响小鼠前成骨细胞的可能作用机制。方法:以小鼠前成骨细胞MC3T3为实验对象,分别以不同浓度(0、0.25、0.5、1、1.5、2、5、10mmol/L)的阿司匹林诱导液进行培养:1、通过MTT实验检测不同浓度阿司匹林对MC3T3细胞增殖的影响;2、通过碱性磷酸酶染色及定量分析,检测不同浓度阿司匹林的促成骨分化作用;3、通过茜素红钙结节染色,检测不同浓度阿司匹林的促矿化作用;4、通过蛋白印迹及实时PCR技术,探究阿司匹林作用于MC3T3细胞的可能机制。结果:1、MTT实验结果显示低浓度阿司匹林药物组(0.25、0.5、1、1.5、2mmol/L)OD值较对照组无差异(P0.05),中高浓度阿司匹林组(5-10mmol/L)OD值较对照组明显减低(P0.01);2、碱性磷酸酶染色结果示1.5mmol/L阿司匹林药物组碱性磷酸酶阳性颗粒较其他实验组最为显著;3、碱性磷酸酶定量分析结果示在第7、10、14天各浓度阿司匹林药物组(0.5、1、1.5、2、3mmol/L)碱性磷酸酶含量均较对照组均明显升高(P0.01),其中以1.5mmol/L阿司匹林组最显著(P0.01);4、茜素红染色结果示各浓度阿司匹林药物组(0.5、1、1.5、2、3mmol/L)钙结节数量及面积均较对照组增多,其中以1.5mmol/L阿司匹林组增多最为显著;5、蛋白印迹结果示1.5mmol/L阿司匹林组OPG蛋白及Col1a蛋白表达较对照组显著增加(P0.01),RANKL蛋白表达较对照组显著减少(P0.01)。6、实时PCR检测结果提示1.5mmol/L阿司匹林组OPGmRNA表达升高、RANKLmRNA表达减低最为显著(P0.01)。结论:1、提示低浓度阿司匹林对MC3T3细胞增殖无影响,中高浓度阿司匹林对MC3T3细胞增殖起抑制作用;2、1.5mmol/L阿司匹林组促成骨、促矿化作用较其他浓度药物组及对照组最显著;3、阿司匹林作用OPG/RANKL/RANK信号通路,通过刺激OPG表达并抑制RANKL表达起到促成骨作用。
【关键词】：骨质疏松 阿司匹林 成骨细胞 细胞核因子受体活化因子配体 骨保护素
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R965
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 引言11-20
• 1.1 骨质疏松症概况11-13
• 1.1.1 骨质疏松症的定义11
• 1.1.2 骨质疏松症的诊断标准及临床表现11
• 1.1.3 世界范围内骨质疏松症的流行病学及骨松骨折11-12
• 1.1.4 我国骨质疏松症的流行病学及骨松骨折12-13
• 1.2 骨质疏松症的治疗13-16
• 1.2.1 促进骨形成的药物13-14
• 1.2.2 抑制骨吸收的药物14-16
• 1.3 骨质疏松症涉及的信号通道16-17
• 1.3.1 OPG/RANKL/RANK信号通路16
• 1.3.2 Wnt/β-catenin信号通路16-17
• 1.3.3 组织蛋白酶K信号通路17
• 1.3.4 骨形态蛋白信号通路17
• 1.4 阿司匹林概况17-19
• 1.4.1 阿司匹林的起源17-18
• 1.4.2 阿司匹林在临床中的运用18-19
• 1.5 阿司匹林与骨质疏松之间的关系19-20
• 第2章 阿司匹林对小鼠前成骨细胞增殖及成骨分化的影响20-35
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 主要材料20
• 2.1.2 主要试剂20
• 2.1.3 主要仪器20-21
• 2.2 实验方法21-25
• 2.2.1 小鼠前成骨细胞的培养21-22
• 2.2.2 诱导培养基的配制22
• 2.2.3 小鼠前成骨细胞的成骨诱导22
• 2.2.4 阿司匹林+诱导培养基配制22
• 2.2.5 小鼠前成骨细胞的诱导后加药处理22-23
• 2.2.6 MTT增殖实验23-24
• 2.2.7 碱性磷酸酶染色24
• 2.2.8 碱性磷酸酶活性测定24-25
• 2.2.9 钙结节染色25
• 2.3 统计学分析25-26
• 2.4 实验结果26-31
• 2.4.1 MTT细胞增殖曲线26-27
• 2.4.2 碱性磷酸酶染色27-28
• 2.4.3 碱性磷酸酶活性测定28-30
• 2.4.4 钙结节染色30-31
• 2.5 讨论31-35
• 第3章 阿司匹林对小鼠成骨细胞OPG/RANKL/RANK基因蛋白及mRNA的表达影响35-47
• 3.1 实验材料35-37
• 3.1.1 主要材料35
• 3.1.2 主要试剂35-36
• 3.1.3 主要仪器36-37
• 3.2 实验方法37-41
• 3.2.1 分组方法37
• 3.2.2Western Blot检测蛋白的表达37-39
• 3.2.3 RT-PCR(Real Time PCR)检测RNA的表达39-41
• 3.3 统计学分析41
• 3.4 实验结果41-45
• 3.4.1 Western Blot检测蛋白的表达41-44
• 3.4.2 RT-PCR测定成骨细胞基因表达44-45
• 3.5 讨论45-47
• 第4章 结论与展望47-48
• 4.1 结论47
• 4.2 展望47-48
• 致谢48-49
• 参考文献49-52
• 攻读学位期间的研究成果52-53
• 综述53-67
• 参考文献63-67

【参考文献】

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本文编号：1087449