新型小肽RWR的毒理学和稳定性研究

发布时间：2017-10-29 15:31

  本文关键词：新型小肽RWR的毒理学和稳定性研究

  更多相关文章： RWR RGD 毒理学 稳定性

【摘要】：目的:根据创新药物临床前研究要求,对创新型小肽RWR的毒理学、稳定性进行研究,为RWR后期药代动力学及结构优化提供理论和实验依据。方法:1.RWR的制备与鉴定采用Fmoc固相合成法制备RWR,反相高效液相色谱法分离纯化后,真空冷冻干燥得到RWR,经电离喷雾离子化质谱(Electrospray ionization mass,ESI-MS)鉴定RWR的纯度。2.RWR毒理学研究2.1小鼠急性毒性试验根据RWR前期研究(见赵海霞硕士学位论文)药效学的作用剂量,设计出毒理学给药剂量,记录小鼠的死亡情况,确定其最大耐受剂量(MTD)。2.2 RWR对小鼠骨髓细胞微核生成率的影响分别按照24、96和120 mg/kg对小鼠腹腔注射给药,取小鼠骨髓细胞制片,计数骨髓多染红细胞微核量,检测RWR对小鼠的致突变性。2.3 RWR对小鼠精子畸变率的影响按照上述给药剂量对小鼠腹腔注射给药,取小鼠附睾制片,在显微镜下计数畸形精子,检测RWR对生殖细胞的遗传毒性作用。2.4慢性毒性试验分别按照4.5、18.8和75.0 mg/kg腹腔注射给药,检测RWR对大鼠体质量、食物利用率、主要脏器系数、血生化等各项指标及肺、肝、脾、肾、心脏组织的影响,观察大鼠对RWR的毒性反应及其程度,提供毒性反应靶器官,确定无毒反应剂量。3.RWR稳定性实验研究利用LC-MS/MS法测定RWR的50%甲醇溶液样本、采用EDTA抗凝的SD大鼠血浆样本以及加入不同稳定剂后采用EDTA抗凝的SD大鼠血浆样本,检测RWR配制初和配制后冰上放置4h后的药量。获得能够使RWR在血浆当中稳定存在的化学环境,为后续的药代动力学实验做准备。4.RWR衍生物的设计及稳定性研究在RWR氨基端融合ω-氨基辛酸,设计合成更为稳定的RWR衍生物,初步药效学证明其活性与RWR相当,利用上述方法检测其在甲醇和血浆中的稳定性,这为设计合成和开发更稳定的抗栓多肽类药物提供技术思路。结果:1.利用固相合成方法合成了1g RWR,其纯度可达到99.006%,能够满足后续试验用药量。2.急性毒性试验最大耐受剂量大于120 mg/kg;随着RWR浓度的增加;小鼠骨髓细胞微核生成率、精子畸变率没有显著性差异;SD大鼠体重、食物利用率、血液生化指标、脏体比无统计学差异,脏器组织形态学无明显变化。3.经检测RWR在各种条件下的稳定性结果介于40%~70%之间,以稳定性准确度介于85~115%视为样品稳定判定,其在50%甲醇溶液及血浆中稳定性较差。4.RWR衍生物在甲醇和血浆中的稳定性介于86%~90%之间,说明RWR衍生物能够在甲醇和血浆样本中稳定存在。结论:RWR符合药品安全性毒理学评价标准,表明RWR作为药用研究有进一步开发利用的价值。但稳定性试验表明RWR在甲醇溶液及血浆中稳定性较差,需要大剂量才能发挥其生物学活性,在RWR中增加了ω-氨基辛酸后,稳定性得到大幅提高,表明RWR衍生物性质更稳定,为开发更加稳定的抗栓小肽药物提供了理论依据和技术思路。
【关键词】：RWR RGD 毒理学 稳定性
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 常用缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-16
• 第一部分 实验用RWR纯化及鉴定16-21
• 1 材料与方法16-18
• 2 实验结果18-20
• 2.1 合成所得初产品分离纯化后纯度检测18-19
• 2.2 RWR的鉴定19-20
• 3 讨论20
• 4 结论20-21
• 第二部分 RWR的毒理学研究21-38
• 1 急性毒性试验21-24
• 1.1 材料与方法21-22
• 1.2 实验结果22-24
• 2 小鼠骨髓细胞微核生成率试验24-26
• 2.1 实验目的24
• 2.2 材料与方法24
• 2.3 实验结果24-26
• 3 小鼠精子畸形试验26-28
• 3.1 实验目的26
• 3.2 实验材料与方法26
• 3.3 实验结果26-28
• 4 亚慢性毒性试验28-35
• 4.1 实验材料与方法28
• 4.2 实验结果28-35
• 5 统计学分析35-36
• 6 讨论36-37
• 7 结论37-38
• 第三部分 RWR稳定性研究38-54
• 1 实验材料与方法38-42
• 2 实验结果42-52
• 2.1 RWR甲醇溶液稳定性42-43
• 2.2 RWR血浆样本43
• 2.3 RWR血浆样本加入稳定剂43-49
• 2.4 RWR血浆样本加入稳定剂及冰上操作49-52
• 3 讨论52-53
• 4 结论53-54
• 第四部分 RWR衍生物的设计及稳定性研究54-64
• 1 实验材料与方法54-58
• 2 实验结果58-62
• 2.1 RWR衍生物甲醇溶液稳定性58
• 2.2 RWR衍生物血浆样本稳定性58-60
• 2.3 RWR衍生物血浆样本 13d稳定性60-62
• 3 讨论62-63
• 4 结论63-64
• 参考文献64-67
• 综述67-77
• 参考文献74-77
• 致谢77-78
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果78-79
• 个人简历79

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本文编号：1113605