内质网相关降解通路小分子抑制剂对肿瘤细胞的抑制作用以及肿瘤干细胞的内质网应激调控机制研究

发布时间：2017-11-03 11:09

  本文关键词：内质网相关降解通路小分子抑制剂对肿瘤细胞的抑制作用以及肿瘤干细胞的内质网应激调控机制研究

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【摘要】：目的探究内质网相关降解通路(Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation, ERAD)小分子抑制剂Eeyarestatinl (Eerl)与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用。方法不同剂量的Eerl处理结肠癌SW480和胰腺癌PANC-1细胞,MTS法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡率；Eerl单独或与抗癌药物顺铂(cisplatin, CDDP)和硼替佐米(Bortezomib, BTZ)联用处理SW480和PANC-1细胞,Western blot法检测细胞中Poly ADP-ribose polymerase (PARP)及其剪切体和糖调节蛋白(GRP78/BiP)的蛋白表达。结果Eerl抑制SW480和PANC-1细胞增殖、促进细胞凋亡(P0.01),且呈剂量-效应关系；联合用药的实验结果显示Eerl提高了SW480和PANC-1细胞对CDDP和BTZ的敏感性(P0.01)；Western blot结果表明,联合用药促进了PARP在SW480和PANC-1细胞中的剪切,同时BTZ处理可提高BiP蛋白的表达,提示了内质网应激(Endoplasmic Reticulum stress, ERS)反应的激活。结论ERAD通路抑制剂Eerl可明显增强传统抗癌药物CDDP和BTZ的抗癌活性,这为抗癌新药研发及肿瘤耐药性逆转剂的研究提供了新的线索。目的建立以成球培养法为主的体外富集人乳腺癌细胞MDA-MB-231肿瘤干细胞(Breast cancer stem cell, BCSC)的方法,并运用内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导剂处理肿瘤干细胞,探究其内质网应激反应的变化以及内质网应激反应对干性的影响并对其机制进行初步探索。方法采用无血清低吸附板培养MDA-MB-231细胞,获得细胞球,裸鼠实验检测其体内成瘤能力,RT-PCR, Western Blot检测其干性标志物及内质网应激相关标志物在mRNA和蛋白水平的表达；将内质网应激诱导剂Tunicamycin和Thapsigargin加入成球培养基,检测内质网应激对成球的影响以及干性标志在RNA和蛋白水平的变化；结晶紫试验检测Tunicamycin和thapsigargin对2D成克隆能力的影响；流式细胞术检钡Tunicamycin对贴壁培养的MDA-MB-231细胞ALDH+细胞侧群的影响；Western Blot检测不同程度的内质网应激对与干性相关的蛋白质如Skp2等的影响。结果体外无血清培养,一周可获得较大的乳腺癌细胞球,其高表达Sox2、Nanog、 Oct4等干性标志物,具有高致瘤性；与贴壁细胞相比,细胞球有明显的内质网应激反应,呈现XBP-1剪切、GRP78、CHOP、ATF4显著高表达；内质网应激反应可明显减弱成球能力和2D成克隆能力并下调ALDH+细胞侧群和与干性相关蛋白质如Sox2表达。结论成球培养法可成功富集到乳腺癌干细胞；乳腺癌干细胞有显著的内质网应激;诱导乳腺癌干细胞内质网应激可降低其干性。
【关键词】：内质网相关蛋白降解通路 ERS反应 p97化疗治疗 肿瘤干细胞 内质网应激 衣霉素
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96
【目录】：

• 缩略语4-5
• 导语5-6
• 第一部分 内质网相关降解通路小分子抑制剂与传统抗癌药物联合运用对肿瘤细胞的抑制作用6-33
• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 材料与方法12-19
• 第三章 结果19-27
• 第四章 讨论27-29
• 第五章 结论29-30
• 参考文献30-33
• 第二部分 探索肿瘤干细胞的内质网应激反应33-67
• 中文摘要34-35
• 英文摘要35-36
• 第一章 前言36-40
• 第二章 材料与方法40-49
• 第三章 结果49-59
• 第四章 讨论59-61
• 第五章 结论61-62
• 参考文献62-67
• 综述67-75
• 参考文献72-75
• 致谢75-78
• 个人简历78

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6 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;肿瘤干细胞将成治癌新靶点[N];医药经济报;2003年

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