慢性糖皮质激素对小鼠神经元NLRP-1炎症小体激活和损伤的影响及人参皂苷Rg1的调节作用

发布时间：2017-11-06 08:07

  本文关键词：慢性糖皮质激素对小鼠神经元NLRP-1炎症小体激活和损伤的影响及人参皂苷Rg1的调节作用

  更多相关文章： 神经退行性疾病 糖皮质激素NLRP-1 炎症小体 神经炎症 人参皂苷Rg1

【摘要】：神经炎症在许多神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病等疾病中起着重要的作用,慢性应激水平糖皮质激素对神经元的结构和功能都具有损伤作用,与阿尔茨海默病的发生发展密切相关。而慢性糖皮质激素是否促进大脑神经元发生神经炎症病变研究较少,本课题的研究可以为治疗神经退行性疾病提供新的思路和靶点。目的：观察慢性糖皮质激素对雄性小鼠皮层和海马神经元NLRP-1炎症小体激活及对神经元损伤的影响,同时研究人参皂苷Rg1的调节作用及其机制。探讨慢性糖皮质激素对海马神经元损伤的可能机制,以便为神经元退行性疾病的防治提供新的思路和靶点,为人参皂苷Rg1对其的保护应用提供实验依据。方法：1.雄性小鼠分为对照组,地塞米松(DEX) 5mg/kg组,各组再分为7d、14d、21d、28d四个时点。DEX组小鼠颈背部皮下分别注射DEX (5mg/kg) 7d、14d21d和28d,对照组注射等容量生理盐水。每周称重观察小鼠体重的变化情况；旷场实验记录小鼠的自发活动情况;HE染色观察小鼠皮层和海马区神经元病理形态学变化;Hoechst 33258染色检测神经元凋亡情况;免疫组化检测MAP-2蛋白表达的变化;Western blot检测GR、NLRP-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、Caspase-5、IL-1β和IL-18蛋白的表达变化;Real-time PCR检测GR、ASC、NLRP-1、Caspase-1和IL-1β的mRNA的表达变化；ELISA检测DEX作用于28天小鼠脑组织海马区IL-1β, IL-6和TNF-α的含量变化。2.雄性小鼠分为对照组、DEX模型组、RU486组、人参皂苷Rg1(1、2、4mg/kg)组,作用28天。旷场实验记录小鼠自发活动情况；新体识别实验检测小鼠的识别记忆功能；HE染色观察小鼠脑组织神经元病理形态学变化；免疫组化检测MAP-2蛋白表达的变化；Western blot检测GR、NLRP-1、ASC、Caspase-1、Caspase-5、 IL-1β、IL-18蛋白表达的变化。结果：1.与对照组比较DEX处理7、14、21、28d小鼠体重明显下降。HE染色结果显示正常对照组小鼠皮层和海马CA1及CA3区神经元染色均匀,排列整齐,未见明显异常改变,DEX处理7、14d神经元出现轻微的异常,而DEX处理21、28d组在皮层和海马CA1及CA3区神经元可见排列紊乱、嗜酸性变、核浓缩、核深染等异常改变。Hoechst33258核染色实验结果显示,对照组神经元细胞核型完整、圆润、均匀荧光,DEX处理21、28d组神经元凋亡明显增加,细胞核呈致密浓染或呈碎块状。小鼠旷场实验显示,DEX处理21、28d组小鼠运动距离、运动速度、穿线次数和站立次数等明显减少。免疫组化结果显示,DEX处理21、28d组小鼠皮层、海马CA1及CA3区神经元MAP2的蛋白表达明显下降。Western blot结果显示,与对照组比较,DEX处理7、14、21和28d组小鼠脑组织GR受体表达均明显下降。DEX处理21和28d组小鼠NLRP1、Caspase-1、Caspase-5、ASC、IL-1β、IL-18等表达明显增加,NLRP3表达无明显改变。Q-PCR结果显示,与对照组比较,DEX处理21和28d组小鼠脑组织GR的mRNA表达水平明显下降,NLRP1、 Caspase-1、ASC、IL-1β表达水平明显增加。ELISA结果显示,与对照组比较,DEX作用于28d的小鼠脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α的表达明显增加。2.HE染色结果显示,对照组小鼠皮层和海马神经元未见明显异常改变,DEX处理模型组小鼠皮层和海马神经元可见排列紊乱、嗜酸性变、核浓缩等病理变化,RU486及人参皂苷Rgl(2、4mg/kg)组可以改善皮层和海马神经元嗜酸性变和核浓缩、核深染等病理改变。旷场实验结果显示,与对照组比较,模型组小鼠运动距离、运动速度、穿线次数和站立次数均有所降低；与模型组比较,RU486组和人参皂苷Rgl(2、4mg)组小鼠运动距离、运动速度、穿越格子数和站立次数均明显增加。新体识别实验的结果显示,与对照组比较,DEX组小鼠进入新事物区域的次数,在新事物区域活动时间明显减少；与DEX组比较,RU486组和Rg1(2、4mg/kg)组小鼠进入新事物区域的次数、在新事物区域活动时间明显延长。免疫组化结果显示,Rgl (2、4mg/mg)组和RU486均可以提高皮层和海马区神经元MAP2蛋白表达。Western blot结果显示,人参皂苷(2、4mg/kg)组和RU486可以上调脑组织GR蛋白表达以及下调NLRP1、Caspase-1、Caspase-5、ASC、IL-1β、IL-18等蛋白的表达。结论：实验结果显示,慢性糖皮质激素作用可明显损害小鼠的自发活动和探索行为,明显降低小鼠皮层和海马神经元GR的表达,增加NLRP-1炎症小体表达和炎症因子的生成,促进神经元的损伤。糖皮质激素受体阻断剂RU486和具有抗氧化作用的人参皂苷Rg1能够改善小鼠的自发活动和探索行为,改善小鼠对新事物的探索行为,可以增加小鼠海马区脑组织GR的表达,减少NLRP-1炎症小体的表达和炎症因子的生成。表明应激水平糖皮质激素的长期应用可以促进皮层和海马神经元NLRP-1炎症小体激活诱导神经元损伤,人参皂苷Rg1可以通过抑制NLRP-1炎症小体的激活改善糖皮质激素长期作用引起的神经元炎症损伤。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 韩冬;张铁军;唐铖;田成旺;;人参皂苷的药动学研究进展[J];中草药;2009年02期

2 余潇苓;苗青;方翠芬;;人参皂苷水溶液热稳定性研究[J];中国现代应用药学;2011年12期

3 付聪;杨艳芳;王业静;;药典法和新方法测定人参皂苷含量比较[J];亚太传统医药;2013年11期

4 杨雨;郑斯文;金银萍;姚春林;王英平;;人参皂苷的提取分离方法研究进展[J];江苏农业科学;2014年05期

5 于超,刁长发,夏文娟,周碧珍;反相高效液相色谱法测定人参及其制剂中人参皂苷Rg1含量[J];药物分析杂志;2000年04期

6 王启祥,吕修梅,张晋秀;人参皂苷含量变化研究概况[J];西北药学杂志;2002年05期

7 于荣敏,宋永波,张辉,叶文才,张荫麟,姚新生;西洋参冠瘿组织培养及其人参皂苷Re和人参皂苷Rg_1的产生[J];生物工程学报;2003年03期

8 卢新政,张晓文,黄峻,马根山,侯麦花;人参皂苷Rg_1对培养猪骨髓基质细胞增殖的影响[J];中国药理学通报;2003年03期

9 董淑华,陈波,马忠泽,侯秀云,陈英杰;人参皂苷的体内代谢反应研究[J];人参研究;2003年01期

10 朱照静,邓开英;红参中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的含量测定[J];中国实验方剂学杂志;2003年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱伟;易琼;王鲁;付本懂;贺常亮;吕爽;毕文岩;;人参皂苷Rh2的药理学研究进展[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年

2 王悦;白玉;刘虎威;;高效液相色谱法测定人参中人参皂苷的方法[A];全国生物医药色谱学术交流会（2010景德镇）论文集[C];2010年

3 尚文斌;杨颖;姜博仁;金华;周丽斌;刘尚全;陈名道;;人参皂苷Rb1促进3T3L1细胞的脂肪形成和抑制脂肪分解[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年

4 周红祖;胡胜全;余惠e，

本文编号：1148045