鸭肾间充质干细胞建系及普伐他汀对其增殖的影响

发布时间：2017-11-11 14:38

  本文关键词：鸭肾间充质干细胞建系及普伐他汀对其增殖的影响

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【摘要】：目的建立北京鸭肾间充质干细胞(Nephric Mesenchymal Stem Cells,NMSCs)的体外培养体系,研究其生物学特性,探究普伐他汀对鸭肾间充质干细胞增殖作用的影响。方法(1)NMSCs的分离培养:以15日龄北京鸭胚胎肾为研究材料,采用混合酶消化法获得NMSCs,并进行传代、冻存和复苏。(2)NMSCs生物学特性研究:形态学观察;绘制细胞生长曲线,计算群体倍增时间;特异性表面标志物RT-PCR和免疫荧光检测;多向分化潜能鉴定:将NMSCs定向诱导成脂肪细胞、胰岛细胞、肝样细胞和上皮细胞,并对诱导后的细胞进行特异性染色、RT-PCR和免疫荧光鉴定。(3)普伐他汀对NMSCs增殖作用研究:将细胞随机分为对照组和实验组,实验组向培养基中分别加入0.001、0.01、0.1、1、10μmol?L-1五种浓度的普伐他汀,观察药物作用后细胞的形态学变化;MTS比色法检测细胞增殖情况;增殖基因荧光定量PCR检测;流式细胞术检测细胞特异性标记抗原和增殖核抗原的阳性率。结果(1)北京鸭胚胎NMSCs传至23代,呈长梭形,具有较强的增殖能力。(2)细胞生长曲线呈典型的“S”型,经历潜伏期、对数期、稳定期和衰退期,符合细胞体外生长的一般规律,细胞的群体倍增时间分别为31.85、35.07、40.98h。(3)RT-PCR检测NMSCs阳性表达Vimentin、Fibronectin、CD29、CD71、CD44和CD73,阴性表达CD34和CD45,免疫荧光检测NMSCs阳性表达Vimentin、CD29、CD71和CD44。(4)成功地将NMSCs诱导为脂肪细胞、胰岛细胞、肝样细胞和上皮细胞。(5)普伐他汀作用76 h后细胞呈长梭形,形态无明显变化。(6)经MTS检测,与对照组比较,普伐他汀组浓度为0.01、0.1、1μmol?L-1均可促进NMSCs增殖,浓度为0.001μmol?L-1对NMSCs增殖影响较小,10μmol?L-1对NMSCs无促增殖作用。(7)与对照组比较,普伐他汀组浓度为0.001、0.01、0.1μmol?L-1时增殖基因Ki67的相对表达量升高,0.01、0.1、1μmol?L-1时增殖基因PCNA的相对表达量升高,其他浓度组与对照组相比差异不显著。(8)NMSCs经0.1μmol?L-1普伐他汀作用1 w后,细胞表面标记抗原的表达量无明显差异。Vimentin阳性率对照组为98.51%,实验组为97.43%;CD44阳性率对照组为97.21%,实验组为97.78%;细胞增殖核抗原的表达量增加,Ki67阳性率对照组为2.39%,实验组为12.3%;PCNA阳性率对照组为11.07%,实验组为26.14%。结论本研究成功建立了北京鸭胚胎肾间充质干细胞体外培养体系,并对NMSCs自我增殖和多向分化潜能进行鉴定,证实体外培养NMSCs为鸭胚胎肾来源的间充质干细胞,与已知的间充质干细胞具有相似的生物学特性。普伐他汀对NMSCs作用后不影响其细胞形态和生物学特性,普伐他汀浓度为0.001~1μmol?L-1时可促进NMSCs增殖,浓度为10μmol?L-1对NMSCs没有促增殖作用,普伐他汀作用于细胞的研究为临床用药提供理论基础和实验依据。
【学位授予单位】：佳木斯大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨宁强;岳中瑾;;肾脏干细胞研究进展[J];国际泌尿系统杂志;2006年04期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 刘喜红;胚胎后肾间充质细胞移植对急性肾小管坏死再生修复的实验研究[D];中南大学;2007年

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本文编号：1171836