酸敏脂质体的制备和体外性质研究

发布时间：2017-11-13 14:03

  本文关键词：酸敏脂质体的制备和体外性质研究

  更多相关文章： 酸敏脂质体 SA-R8 DSPE-PEG-pHLIP siRNA MCF-7

【摘要】：目的:由于肿瘤细胞外为微酸环境,而设计构建一种微酸环境敏感的纳米载体,该载体可实现核酸类药物si RNA的肿瘤组织水平、细胞水平甚至细胞器水平的高效定位递送。通过合成DSPE-PEG-p HLIP,达到对微酸环境下肿瘤细胞膜的靶向定位和协助目的药物的内涵体逃逸,而精氨酸八聚体带正电,可提高si RNA的载药量。本课题中,将精氨酸八聚体和硬脂酸偶合,得到阳离子聚合物,SA-R8的多个位点通过静电吸附作用与si RNA形成SA-R8/si RNA复合物,采用薄膜分散法制备酸敏脂质体制剂。通过琼脂糖凝胶电泳将阳离子型SA-R8/si RNA复合物制剂的载药效率进行评价,用马尔文粒径仪进行纳米表征,以人乳腺癌细胞(MCF-7)为细胞模型。为了证明该载体材料的p H响应特性,用流式细胞仪和激光共聚焦扫描仪来定量测定分别在p H6.5和p H7.4环境下的细胞摄取率。为了探索si RNA的胞内分布和定位,用激光共聚焦扫描仪来监测酸敏脂质体,从而对其体外性质进行了较为深入的研究和探讨。方法:通过查阅文献及预实验,确定了酸敏型压缩材料SA-R8的合成方法,室温条件下,充N2避光搅拌24h,通过MS对该合成产物进行表征。确定DSPE-PEG-p HLIP导向性脂材的合成方法,室温下,充N2避光搅拌48h后,对其进行MS表征,考察DMF、DMSO、HBS这3种反应溶剂反应的剩余巯基量。在参考文献的基础上,用薄膜分散法制备脂质体,以si RNA为模型药物,粒径和琼脂糖凝胶电泳试验的电泳行为为主要考察指标,从而确定最佳处方工艺,且以制剂外观和粒径作为参考指标,来考察脂质体的稳定性。以人乳腺癌细胞(MCF-7)为细胞模型,流式细胞仪以及激光共聚焦扫描仪来定量评价细胞摄取率,通过激光共聚焦扫描仪来监测酸敏脂质体在细胞中的分布以及定位。结果:通过MS分析,合成得到了SA-R8和DSPE-PEG-p HLIP,冷冻干燥后均为白色絮状固体;DMF、DMSO、HBS这3种反应溶剂反应24h时剩余巯基量分别为8.42%、2.81%、5.61%,继续反应,剩余巯基量基本不变;制备所得的酸敏脂质体粒径较均一且能在一定时间范围内稳定存在。琼脂糖凝胶电泳实验中,压缩材料SA-R8能很好的将si RNA进行包载。相比于普通脂质体,p HLIP修饰的脂质体细胞摄取显著提高,且压缩材料SA-R8脂质体在p H6.5环境下的细胞摄取明显高于在p H7.4,即具有特殊的p H响应性。共聚焦实验显示:带绿色荧光的si RNA分布在细胞内并能很好地定位在细胞质中。结论:以si RNA为模型药物,SA-R8阳离子聚合物为si RNA的载体,DSPE-PEG-p HLIP修饰脂质体表面。通过薄膜分散法制得脂质体,稳定性好,能在一定时间范围内稳定存在。人乳腺癌细胞MCF-7作为细胞模型,以p HLIP作为导向性脂材修饰的脂质体,在p H6.5环境时的细胞摄取效率显著高于p H7.4。压缩材料SA-R8能很好地提高si RNA的载药量,从而显著提高si RNA的释放。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943

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本文编号：1180973