重组人睫状神经营养因子纯化工艺的建立

发布时间：2017-11-14 07:13

  本文关键词：重组人睫状神经营养因子纯化工艺的建立

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【摘要】：目的建立适于生产应用的重组人睫状神经营养因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rh CNTF)纯化工艺,并对纯化产物进行鉴定。方法将CNTFnew CC22突变体工程菌BL21(DE3)菌体破碎上清经25%饱和度硫酸铵沉淀后,沉淀上清先后经Butyl HP疏水层析和Q HP阴离子交换层析进行纯化。通过非还原SDS-PAGE和反相高效液相色谱分析(RP-HPLC)检测样品纯度;质谱法测定rh CNTF的相对分子质量;Edman化学降解法测定rh CNTF的N-端氨基酸序列;TF-1细胞/CCK-8比色法和对饮食诱导性肥胖(diet-induced obesity,DDIO)大鼠的减肥作用分别测定rh CNTF的体外和体内生物学活性。结果纯化后rh CNTF的纯度可达99.6%,纯化回收率为34.5%;相对分子质量为21 153;N-端15个氨基酸序列为Ala-Phe-Thr-Glu-His-Ser-Pro-Leu-Thr-Pro-His-Arg-Arg-Asp-Leu;生物学比活性高于2×106 IU/mg,并能有效降低DIO大鼠体重。结论经3步纯化成功获得了高纯度的rh CNTF,为进一步对其性质、功能和生产应用研究奠定了基础。
【作者单位】： 北京生物制品研究所有限责任公司;
【基金】：北京市科委“生物医药与生命科学创新培育研究一创新品种临床前研究专项”(z151100003915068) 国药集团新产品开发基金(2011SW02)
【分类号】：R977
【正文快照】： 睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是由位于外周神经和中枢神经系统的胶质细胞表达的一种神经细胞因子,人类CNTF(h CNTF)相对分子质量为20 000~24 000,仅在第17位有1个Cys,为酸性蛋白质。过去30年研究发现,CNTF对神经元、少突胶质细胞、肌肉细胞、骨细胞、

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1 宋艳;王智鼎;李岳飞;邱岚;姜秀梅;孙德军;;兔心肌中次黄嘌呤纯化工艺的优化[J];中国生化药物杂志;2012年06期

2 ;[J];;年期

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本文编号：1184393