心衰模型中冠状动脉平滑肌细胞钙异常的研究

发布时间：2017-11-14 09:03

  本文关键词：心衰模型中冠状动脉平滑肌细胞钙异常的研究

  更多相关文章： 心衰大鼠 冠状动脉平滑肌细胞 钙清除 ROS

【摘要】：目的:研究心衰个体中冠状动脉平滑肌细胞钙清除异常及ROS水平。方法:1.30只成年雄性SD大鼠,体重250g左右,随机分为:假手术组(n=10),心衰组(n=20),心衰组行左冠状动脉前降支结扎来建立心衰模型,假手术组为同期开胸但不结扎。建模12周后,随机选10只心衰组大鼠,分别取其缺血区及非缺血区的冠状动脉血管。2.采用木瓜蛋白酶和Ⅱ型胶原酶两步酶消化法获取单个冠状动脉平滑肌细胞。3.用免疫荧光法对冠状动脉平滑肌细胞进行鉴定。4.采用流式细胞术测各组冠状动脉平滑肌细胞内游离钙离子浓度和ROS水平。5.利用Western blot法测细胞内p47phox、p-p47phox、SERCA及NCX蛋白的表达水平。6.采用Real-time qRT-PCR检测p47phox、SERCA及NCX在mRNA水平上的改变。结果:1.免疫荧光染色法鉴定分离所得细胞为平滑肌细胞。2.心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)的钙离子水平、ROS水平均较假手术组明显增高(P0.01),两心衰组相比,钙离子水平及ROS水平均无明显差异(P0.05)。3.与假手术组相比,心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)p47phox、p-p47phox表达明显增加(P0.05);心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)NCX表达较假手术组显著增加(P0.01);心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)SERCA表达较假手术组显著减少(P0.01)。两心衰组相比,p47phox、p-p47phox、NCX及SERCA表达无明显差异(P0.05)。4.与假手术组相比,心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)的p47phox、NCX的mRNA表达明显上调(P0.01);心衰组(缺血区)及心衰组(非缺血区)SERCA的mRNA表达明显下调(P0.01)。两心衰组相比,p47phox、NCX及SERCA的mRNA表达无明显差异(P0.05)。结论:1.心衰时冠状动脉血管(缺血区及非缺血区)的平滑肌细胞内钙离子浓度均升高,血管舒张功能障碍,血管发生痉挛,导致心衰。2.心衰时冠状动脉血管(缺血区及非缺血区)的平滑肌细胞内ROS水平上调,血管硬度增加,导致心衰。3.心衰时NCX表达增多,SERCA表达减少,导致平滑肌细胞内钙清除异常。4.心衰时p47phox发生磷酸化,p47表达增加,使平滑肌细胞内ROS产生增多,影响钙稳态。
【学位授予单位】：河北大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R965

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本文编号：1184727