二甲双胍对LPS诱导的巨噬细胞趋化因子表达的调节及其机制的探讨

发布时间：2017-11-20 21:29

  本文关键词：二甲双胍对LPS诱导的巨噬细胞趋化因子表达的调节及其机制的探讨

  更多相关文章： 二甲双胍 AMPK NF-κB 巨噬细胞 趋化因子

【摘要】：背景与目的:炎症反应参与多种疾病的发生发展,包括自身免疫性疾病、糖尿病、心血管疾病、肿瘤等。免疫细胞的招募和活化在炎症反应中发挥重要作用,巨噬细胞作为抵御外界刺激的第一道防线,是机体固有免疫的重要组成细胞。巨噬细胞激活后分泌大量趋化因子,趋化因子表达和功能异常与自身免疫性疾病、感染性疾病、糖尿病和肿瘤等炎症相关疾病密切相关。其中CC类和CXC类趋化因子是最主要的趋化因子家族,在调节炎症细胞和免疫细胞趋化迁移中发挥关键作用。大量研究表明临床上治疗糖尿病的常用药AMPK激活剂二甲双胍,具有明显的不依赖于降糖作用的抗炎效应,并且活化AMPK可以抑制NF-κB信号通路从而下调TNF-α等炎症因子。但是,迄今为止,AMPK是否影响趋化因子及其机制未见报道。本研究旨在观察AMPK激活剂二甲双胍对LPS诱导巨噬细胞趋化因子CCL2、CXCL10、CXCL11表达水平的影响及其机制。方法:1、分别观察LPS和二甲双胍对趋化因子表达的影响。不同浓度LPS处理巨噬细胞不同时间后,利用蛋白免疫印迹法检测细胞内CXCL10、CXCL11的表达水平和AMPK磷酸化程度;二甲双胍处理细胞不同时间后,采用q RT-PCR检测CCL2、CXCL10、CXCL11 m RNA的表达水平,从而确定药物剂量和处理时间。2、观察AMPK激活剂二甲双胍对LPS诱导的趋化因子m RNA水平的影响。实验分组:空白对照组、二甲双胍组、LPS组、LPS+二甲双胍组。RAW264.7巨噬细胞汇合度达到70%后,换成正常培养液或含有相应药物的培养液,处理相应时间后采用q RT-PCR检测CCL2、CXCL10、CXCL11m RNA表达情况。3、观察AMPK抑制剂Compound C与二甲双胍共孵育对LPS诱导的趋化因子m RNA水平的影响,实验分组:空白对照组、二甲双胍组、LPS组、LPS+二甲双胍组、LPS+二甲双胍+Compound C组。RAW264.7巨噬细胞汇合度达到70%后,换成正常培养液或含有相应药物的培养液培养,处理相应时间后采用q RT-PCR检测CCL2、CXCL10、CXCL11m RNA表达水平。4、观察Compound C与AMPK激活剂AICAR共孵育对LPS诱导的趋化因子m RNA水平的影响,实验分组:空白对照组、AICAR组、LPS组、LPS+AICAR组、LPS+AICAR+Compound C组。RAW264.7巨噬细胞汇合度达到70%后,换成正常培养液或含有相应药物的培养液培养,处理相应时间后采用q RT-PCR检测CCL2、CXCL10、CXCL11 m RNA表达量。5、观察二甲双胍对AMPK、NF-κB信号分子的影响。采用免疫蛋白印迹检测细胞内AMPK和ACC的磷酸化程度及NF-κB p65和IκB磷酸化水平。结果:1、LPS呈剂量和时间依赖性地诱导RAW264.7细胞表达CXCL10、CXCL11。2、二甲双胍呈时间依赖性地下调RAW264.7细胞CCL2、CXCL10、CXCL11m RNA表达水平。3、二甲双胍能够抑制LPS诱导RAW264.7细胞CCL2、CXCL10、CXCL11m RNA表达水平,并且AMPK抑制剂Compound C能够逆转二甲双胍的作用。4、AICAR抑制LPS诱导RAW264.7细胞CCL2、CXCL10、CXCL11 m RNA表达水平,但是,AMPK抑制剂Compound C不能逆转AICAR的作用。5、二甲双胍明显激活AMPK并抑制LPS诱导的IκB和p65(Ser536)磷酸化,但不影响p65(Ser276)磷酸化。结论:二甲双胍抑制LPS诱导巨噬细胞表达趋化因子CCL2、CXCL10和CXCL11,此效应很可能通过干预AMPK/NF-κB信号通路实现。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96

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本文编号：1208612