脂肪乳对离体血管及内皮细胞功能的影响

发布时间：2017-12-08 06:19

  本文关键词：脂肪乳对离体血管及内皮细胞功能的影响

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【摘要】：目的:脂肪乳作为一种常见的肠外营养制剂,越来越多非营养方面的作用被人们所发现,如作为部分局麻药中毒的抢救用药。有研究报道静脉输注脂肪乳可以升高健康人的血压,但其机制尚不清楚,我研究所前期研究结果发现脂肪乳能够逆转内皮性舒张药物乙酰胆碱诱导的血管舒张反应。为进一步研究脂肪乳的逆转血管舒张的作用机制,我们在离体血管组织和细胞水平研究了脂肪乳对其功能的影响。方法:1制备大鼠离体胸主动脉血管环,采用血管张力测定系统,观察记录(1)脂肪乳(Lipid emulsion,LE)对苯丙肾上腺素(phenylephrine,Phe)诱发的血管收缩反应的影响,(2)脂肪乳对乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)诱发的血管舒张反应的影响。2细胞培养,购买原代人主动脉内皮细胞株进行传代培养,当细胞达到90%融合时进行传代培养,将细胞团吹打成细胞悬液,然后种植在纤维连接蛋白包被的培养的圆玻片上,放入细胞培养箱中培养,培养箱需保持37°C恒温和通以含5%CO2和95%氧气的混合气体。培养超过24小时后进行钙离子荧光标记,用钙成像检测系统检测并记录预孵育LE对ATP诱发的人主动脉内皮细胞内钙离子浓度变化的影响。结果:1在大鼠离体胸主动脉血管环上,LE对血管收缩和舒张反应的影响。0.4%脂肪乳预孵育5分钟不影响Phe诱发的血管收缩浓度-反应曲线(P0.05)。Phe(0.001-30μM)诱发离体血管环收缩反应之后,给予Ach(0.0001-3μM),观察并记录Ach(0.0001-3μM)诱发的舒张反应。0.4%LE预孵育5分钟之后,明显抑制Ach诱发的血管舒张反应(P0.05)。2 LE对传代培养的人主动脉内皮细胞钙离子浓度的影响。(1)体外培养24h-48h的血管内皮细胞,3μM Ach可以引起血管内皮细胞[Ca~(2+)]i增加,0.4%LE浴槽灌流孵育5min后Ach诱发的[Ca~(2+)]i升高的幅度明显降低(P0.05)。(2)10μM ATP也可以引起内皮细胞[Ca~(2+)]i增加,0.4%LE浴槽灌流孵育5min后明显抑制ATP(10μM)介导的内皮细胞[Ca~(2+)]i升高(P0.001)。(3)不同浓度的脂肪乳(0.2%,0.4%,0.8%和2.5%)浴槽灌流孵育5min后对内皮细胞[Ca~(2+)]i变化的影响不存在浓度-剂量的依赖性。以0.4%脂肪乳的影响最为明显(P0.001)。0.4%脂肪乳孵育不同时间2min,5min,15min均可以抑制ATP介导的血管内皮细胞[Ca~(2+)]i升高。(4)以0.1m M的EGTA螯合掉细胞外钙离子,0.4%LE浴槽孵育5min后,依旧可以明显抑制ATP(10μM)介导的内皮细胞[Ca~(2+)]i升高(P0.001)。(5)0.4%LE预孵育5min明显抑制5μM环匹克尼酸(CPA)诱导的[Ca~(2+)]i的升高(P0.001)。(6)布比卡因(300μM)可以使得血管内皮细胞[Ca~(2+)]i明显升高。(7)脂肪乳孵育一小时后可以显著抑制10μM ATP刺激两小时后引起的内皮细胞NO释放(P0.05)。结论:大鼠离体胸主动脉血管环,LE短时间孵育后对Ach诱导的血管舒张反应EC50值明显变大。传代的人主动脉内皮细胞,脂肪乳可能通过抑制细胞内内质网钙库释放的途径抑制细胞内钙升高,减少内皮细胞NO的生成,从而抑制血管舒张。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R96

【参考文献】

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1 于芳;李彤;;早期应用脂肪乳对极低出生体重儿体质量增长的影响及安全性分析[J];中国中西医结合儿科学;2015年06期

2 丁e鹲，

本文编号：1265350