新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨

发布时间：2017-12-19 09:22

  本文关键词：新型凝胶纯化凝血酶原复合物的工艺探讨

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【摘要】：目的探索新型凝胶Capto DEAE离子交换柱层析纯化凝血酶原复合物的工艺条件。方法健康人混血浆经离心去除冷沉淀后,采用DEAE-Sephadex A-50凝胶进行吸附,经洗涤、洗脱得到洗脱液;将得到的洗脱液超滤脱盐后,再通过Capto DEAE凝胶柱纯化,制备凝血酶原复合物(prothrombin complex concentrates,PCC)。测定PCC中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及抗凝蛋白C的活性并计算收率;采用Bradford法测定PCC蛋白浓度,再根据测定的4种凝血因子和蛋白C的活性,计算有效成分的比活;以此分析所选工艺条件下Capto凝胶对PCC的纯化效果。结果不同实验方案下,所得制品中FⅡ、FⅨ、FⅩ收率和纯度均较高,且该3种凝血因子均衡度较好;但FⅦ收率和纯度均较低;其中A方案下PCC收率和纯度较好,即Capto DEAE凝胶体系平衡液、洗涤液、洗脱液中柠檬酸钠、Na Cl、p H分别为0.020~0.028 mol/L、0.10~0.15 mol/L、6.9~7.2;0.012~0.020 mol/L、0.10~0.15 mol/L、6.9~7.2;0.005~0.012 mol/L、2.4 mol/L、7.2~7.5时,FⅨ收率为(74.40±10.89)%,比活为(3.31±0.31)IU/mg,抗凝蛋白C的收率和比活均较高。结论采用DEAE-Sephadex A-50批式吸附及Capto DEAE柱层析相结合的新方法制备PCC,在所选择条件下,PCC制品的纯度为2.17~3.31 IU/mg,远优于传统工艺制得的产品,此为高品质PCC的制备提供了新的方法。
【作者单位】： 四川大学化学工程学院;中国医学科学院输血研究所;
【基金】：四川省科技支撑计划(2014SZ0123)
【分类号】：R943
【正文快照】： (1.College of Chemical Engineering,Sichuan University,Chengdu 610065,China;2.Institute of Blood Transfusion,Chinese Academy of Medical Science,Chengdu 610052,China)人凝血酶原复合物(prothrombin complex concentrates,PCC)是从健康人混合血浆分离制备的血液制品

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1 熊莹;赵红卫;徐琦;何琦;方为茂;;大孔阴离子交换树脂从血浆中分离凝血酶原复合物[J];中国医药工业杂志;2009年05期

2 ;[J];;年期

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本文编号：1307692