3,4-二羟基苯甲酸甲酯抗SH-SY5Y细胞氧化损伤作用及其机制

发布时间：2018-01-13 01:32

本文关键词：3,4-二羟基苯甲酸甲酯抗SH-SY5Y细胞氧化损伤作用及其机制　出处：《暨南大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：实验目的:研究3,4-二羟基苯甲酸甲酯(methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)抗过氧化氢叔丁醇(t-butylhydroperoxide,TBHP)所致SH-SY5Y细胞氧化损伤的作用,并对其作用机制进行初步探讨。实验方法:培养SH-SY5Y细胞,用不同浓度的TBHP作用24h,确定建立细胞氧化损伤模型所需的TBHP浓度。分别用不同浓度的MDHB及阳性对照药N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理细胞4 h,继续使用TBHP处理24 h。MTT法、LDH法检测细胞活性,初步确定对该模型有效的药物浓度(2μM、4μM、8μM)。后续实验分组为:空白对照组、溶剂+TBHP组、2μM MDHB+TBHP处理组、4μM MDHB+TBHP处理组、8μM MDHB+TBHP处理组、100μM NAC+TBHP处理组。显微镜下观察细胞形态变化,采用Annexin V/PI双染后用流式细胞仪计算凋亡细胞比率,利用荧光探针2',7'-二氯荧光素双醋酸酯(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化氢酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,酶联免疫法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)含量,采用Western blot法检测MDHB对SH-SY5Y细胞Bcl-2、Bax、caspase 3、Nrf2、p-Akt和Akt蛋白表达的影响。实验结果:2μM、4μM、8μM的MDHB预处理均能够显著提高氧化损伤状态下SH-SY5Y细胞的存活率(P0.01)。同时MDHB能够降低细胞凋亡率(P0.01)、清除自由基(P0.01)、提高细胞GSH-Px活性(P0.01)、SOD活性(P0.05)和降低细胞培养上清中8-OHdG含量(P0.01)。Western blot结果表明,MDHB可能是通过提高抗凋亡蛋白Bcl-2与促凋亡蛋白Bax的比例(P0.01),抑制caspase 3蛋白的激活(P0.01),提高抗氧化蛋白Nrf2的表达(P0.01),并上调Akt蛋白磷酸化水平(P0.05)来发挥抗氧化损伤和抗凋亡作用的。结论:MDHB能够拮抗TBHP引起的SH-SY5Y细胞氧化损伤,其机制可能与减少ROS产生、减少DNA氧化损伤、激活PI3K/Akt-Nrf2信号通路,提高Bcl2/Bax比例,抑制cleaved caspsae-3凋亡通路有关。
[Abstract]:Objective : To study the effect of methyl 3,4 - dihydroxybenzoate ( MDHB ) on oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . Methods : To study the effect of TBHP on the oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . The effects of MDHB on the expression of Bcl - 2 , Bax , caspase 3 , Nrf2 , p - activity in the cells were measured by Western blot . The results showed that MDHB could decrease the apoptosis rate ( P0.01 ) , eliminate free radicals ( P0.01 ) , improve the activity of GSH - Px ( P0.01 ) , and inhibit the activation of caspase 3 protein ( P0.01 ) . Conclusion : MDHB can inhibit the oxidative damage induced by TBHP . The mechanism may be related to reducing the production of ROS , reducing DNA oxidative damage , activating the signal pathway of PI3 - 3 - Nrf2 , increasing the ratio of Bcl - 2 / Bax , and inhibiting the apoptosis pathway of caspase - 3 .

【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R96

【参考文献】