三对苯丙素类同分异构体对HepG2细胞系代谢同工酶CYP3A4、1A1酶表达的研究

发布时间：2018-01-18 01:08

  本文关键词：三对苯丙素类同分异构体对HepG2细胞系代谢同工酶CYP3A4、1A1酶表达的研究　出处：《宁夏医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的：化合物结构是决定药效发挥的最本质基础，本实验选取三对苯丙素类同分异构体补骨脂素、异补骨脂素、欧前胡素、异欧前胡素、阿魏酸和异阿魏酸，讨论其结构变化对HepG2细胞系药物代谢同工酶CYP3A4、1A1调控的影响，并阐述其相关机制，，从而为临床中草药的安全合理使用提供理论基础。 方法： 1.采用MTT比色法测定六种药物作用48h后对体外培养人肝癌HepG2细胞增殖的影响，计算IC50，筛选有效浓度。 2.采用流式细胞术测定六种药物对HepG2细胞周期的影响。 3.通过实时荧光定量PCR技术测定经六种药物处理细胞后HepG2的CYP3A4和CYP1A1的mRNA的表达变化。 4.用免疫荧光法（IF）和蛋白免疫印迹法（WB）定位及定量测定六种药物对HepG2中细胞CYP3A4蛋白酶表达的影响。 结果： 1.给药48h，六种药物在七个浓度（6.25~200μg/mL）作用下对HepG2细胞系增殖均有抑制作用，并有明显的剂量依赖关系。补骨脂素、异补骨脂素、阿魏酸和异阿魏酸均抑制细胞增殖于G2-M期，而欧前胡素和异欧前胡素阻止细胞增殖于G2-M期和S期。 2.六种药物均是CYP3A4mRNA的抑制剂。异补骨脂素的抑制作用比补骨脂素更强；欧前胡素在高中低三个浓度时均为CYP3A4mRNA的弱抑制剂，异欧前胡素的抑制能力明显强于欧前胡素；异阿魏酸对CYP3A4mRNA的抑制作用略强于阿魏酸。 3.六种药物均是CYP1A1mRNA的抑制剂。补骨脂素对CYP1A1mRNA的抑制略比异补骨脂素强；异欧前胡素在低浓度时（25、50μg/mL）对1A1mRNA的抑制作用明显强于欧前胡素，而在高浓度时（100μg/mL）两药作用程度无太大区别；异阿魏酸在高中低三个浓度时对1A1mRNA的抑制作用明显强于阿魏酸。 4. IF和Western Blot实验证实CYP3A4蛋白主要存在于细胞浆中，六种药物作用后的CYP3A4蛋白表达明显降低。 结论: 1.六种药物均为CYP3A4和CYP1A1酶的抑制剂，在临床药物合用时应注意因药物积蓄毒性而造成的不良反应。 2.六种药物均阻止了细胞mRNA和蛋白质的合成进而抑制肿瘤细胞HepG2增殖，且欧前胡素和异欧前胡素同时减弱了DNA的合成从而抑制细胞生长。 3.补骨脂素、异补骨脂素、欧前胡素和异欧前胡素此四者同属呋喃香豆素类化合物，发现呋喃环结构变化是导致此四者对CYP3A4和CYP1A1的mRNA和蛋白差异较大的主要原因；苯环上的酚羟基异构是阿魏酸和异阿魏酸对CYP3A4和CYP1A1酶具有不同抑制强度的原因。
[Abstract]:Objective: the compound structure is the most essential foundation decided to take effect, this experiment selects three of phenylpropanoid similar isomers of psoralen, isopsoralen, imperatorin, isoimperatorin, ferulic acid and isoferulic acid, discusses its structure changes effect on HepG2 cell line of drug metabolism isoenzyme CYP3A4,1A1 regulation, and discusses the related mechanism, thus providing a theoretical basis for clinical rational use of Chinese herbal medicine.
Method锛

本文编号：1438757