维拉帕米通过阻断钙离子内流抑制血管平滑肌细胞钙化研究

发布时间：2018-01-19 08:52

  本文关键词： 维拉帕米 肌细胞 平滑肌 血管钙化 钙通道　出处：《中国全科医学》2015年27期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨维拉帕米抑制高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的作用及可能机制。方法2014年12月—2015年6月选取5~8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只,体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫组化法鉴定。将对数期VSMCs随机分为正常对照组〔含10%胎牛血清(FBS)培养基〕、高磷组(高磷培养基,含10 mml/Lβ-甘油磷酸)、维拉帕米干预组(在高磷培养基的基础上加入维拉帕米至浓度为20 mmol/L)。细胞接受2、4、6 d干预后,检测VSMCs内钙离子水平,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VSMCs内目的基因(smad1、runx2mRNA)表达水平。细胞接受14 d干预后进行钙化检测,包括钙水平测定和茜素红染色情况。结果高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均高于正常对照组(P0.05);维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均低于高磷组(P0.05)。高磷组、维拉帕米干预组4、6 d后VSMCs内钙离子水平分别高于2 d后(P0.05);高磷组6 d后VSMCs内钙离子水平高于4 d后(P0.05);维拉帕米干预组6 d后VSMCs内钙离子水平低于4 d后(P0.05)。高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于正常对照组(P0.05);维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均低于高磷组(P0.05)。高磷组4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于4 d后(P0.05);维拉帕米干预组4 d后VSMCs内smad1 mRNA表达水平高于2 d后,runx2 mRNA表达水平低于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于2、4 d后(P0.05)。高磷组、维拉帕米干预组VSMCs钙水平均高于正常对照组(P0.05);维拉帕米干预组VSMCs钙水平低于高磷组(P0.05)。高磷组、维拉帕米干预组橘红色钙化结节较正常对照组多,维拉帕米干预组橘红色钙化结节较高磷组少。结论维拉帕米在高磷诱导的VSMCs钙化中起抑制作用,其可能是通过抑制钙离子内流进而抑制smad1表达,进一步抑制runx2表达,进而抑制VSMCs发生表型转化来实现的。
[Abstract]:Objective to investigate the inhibitory effect of verapamil on VSMCs induced by high phosphorus in rat vascular smooth muscle cells (VSMCs). Methods from December 2014 to June 2015, 6 healthy male Sprague-Dawley rats (5 weeks old, 8 weeks old) were selected. Rat VSMC was isolated and cultured in vitro and identified by immunohistochemical method. The logarithmic phase of VSMCs was randomly divided into normal control group (containing 10% fetal bovine serum). High phosphorus group (high phosphorus medium, containing 10 mml/L 尾 -glycerophosphoric acid). In the verapamil intervention group (the concentration of verapamil was 20 mmol / L) on the basis of high phosphorous medium, the calcium level in VSMCs was detected after the cells were treated with 2 渭 m / L for 6 days. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the target gene in VSMCs. The expression level of runx2 mRNA. after 14 days of intervention, the cells were tested for calcification, including calcium level determination and alizarin red staining. Results High phosphorus group, verapamil intervention group 2, 4. After 6 days, the level of calcium in VSMCs was higher than that in control group (P 0.05). The level of calcium in VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in high phosphorus group (P 0.05) and verapamil intervention group (4) after 6 days. After 6 days, the level of calcium in VSMCs was higher than that in P0. 05 after 2 d. The level of calcium in VSMCs of high phosphorus group was higher than that of P0.05 after 4 days. The level of calcium in VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in control group after 4 days. In high phosphorus group and in verapamil intervention group, smad1 was found in VSMCs 6 days after treatment with verapamil. The expression of runx2 mRNA was higher than that of normal control group (P 0.05). In verapamil intervention group, the expression of smad1rx2 mRNA in VSMCs was lower than that in high phosphorus group (P 0.05) and high phosphorus group (4) after 6 days. The expression level of smad1rx2 mRNA in VSMCs was higher than that in VSMCs 6 days after 6 days. The expression of runx2 mRNA was higher than that of P0.05 after 4 days. The expression level of smad1 mRNA in VSMCs of verapamil intervention group was higher than that of runx2 mRNA expression after 2 days. After 6 days, the expression level of smad1rx2 mRNA in VSMCs was higher than that in P0.05 + P0.05 group. The level of VSMCs calcium in verapamil intervention group was higher than that in normal control group (P 0.05). The calcium level of VSMCs in verapamil intervention group was lower than that in high phosphorus group (P 0.05). The orange calcified nodules in verapamil intervention group were higher than those in normal control group. Verapamil intervention group had fewer orange calcified nodules than high phosphorus group. Conclusion verapamil plays an inhibitory role in VSMCs calcification induced by high phosphorus. It may be achieved by inhibiting the influx of calcium ions, thus inhibiting the expression of smad1, further inhibiting the expression of runx2, and then inhibiting the phenotypic transformation of VSMCs.
【作者单位】： 河北医科大学第四医院肾内科;
【基金】：河北省自然科学基金资助项目(项目编号:H2012206157)
【分类号】：R965
【正文快照】： Inhibition of the Calcification of Vascular Smooth Muscle Cells by Verapamil Though the Blocking of the Inward Flow ofCalcium Ion LI Tong-miao,XU Jin-sheng,FENG Yu,et al.Department of Nephrology,the Forth Hospital of HebeiMedical University,Shijiazhuang

【共引文献】

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