OAT1介导的芹菜素与阿昔洛韦或阿德福韦相互作用研究

发布时间：2018-02-02 12:59

本文关键词： 人有机阴离子转运体1 MDCK细胞 6-CFL 芹菜素阿昔洛韦阿德福韦　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景OAT1是有机阴离子转运家族中的一员,主要表达在肾脏,负责将底物从血液摄取到肾小管上皮细胞内,从而促进底物的肾小管分泌。OAT1与多种阴离子异源物产生的肾毒性有关。作为肾脏中主要的阴离子转运体,OAT1在药物的代谢动力学、药物-药物相互作用以及药物的毒理学中发挥着重要作用。但由于目前临床上使用的OAT1抑制剂常出现安全性问题,因此筛选有效且低毒的OAT1抑制剂在降低OAT1介导的肾毒性或者避免OAT1介导的药物-药物相互作用方面具有很大的价值。黄酮类化合物由于安全性较高,且具备多种活性,因此一直是研究人员的关注点。临床上,已有将黄酮类药物作为辅助药物与其他西药联合应用以增加疗效的例子,但其中的中药-西药相互作用(drug-druginteraction-DDI)常被人们忽略。药物代谢酶与药物转运体介导的DDI是药物-药物相互作用发生的主要机制。药物代谢酶介导的DDI在过去的几十年里一直是研究人员的研究热点,而由药物转运体介导的DDI报道则相对较少。由于临床上逐渐增多的DDI事件,且这些事件常由药物转运体介导,因此药物与转运体之间的相互作用的研究十分急迫且颇具临床指导意义。芹菜素作为黄酮类化合物,已被报道对多种转运体有抑制作用,如有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)等,本文旨在进一步探索芹菜素与OAT1底物之间发生的相互作用。目的:采用慢病毒感染的方式建立能稳定表达人有机阴离子转运体1(human organic anion transporter1,hO AT1)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞模型,并利用此模型筛选有效的hOAT1抑制剂,继而研究基于hOAT1的药物-药物相互作用,为临床安全合理用药提供实验基础。方法:构建含hOAT1基因的慢病毒质粒,并用其感染细胞,经过筛选获得能稳定表达hOAT1的细胞株。通过RT-qPCR及Western-blot检测细胞株hOAT1mRNA与蛋白的表达情况,并评价两株细胞对底物6-羧基荧光素(6-CFL)的摄取能力。利用细胞模型从体外筛选有效的hOAT1抑制剂,并利用UPLC-MS/MS从体内外探究抑制剂对hOAT1摄取阿昔洛韦的影响。此外,通过MTT实验探究抑制剂是否能降低阿德福韦对MDCK-hOAT1的细胞毒性。结果:稳转株hOAT1 mRNA的表达量是对照株的7204.20倍,蛋白表达量明显高于对照株。稳转株细胞摄取6-CFL的能力是对照株的18.12倍。初筛实验结果显示,芹菜素为hOAT1的有效抑制剂(IC50=0.737μM),且预孵育能增强芹菜素对hOAT1的抑制活性,使其IC50值由0.737μM降低至0.295μM。芹菜素(1μM)能使得MDCK-hOAT1转运阿昔洛韦的能力降低55%(p0.001)。体内实验表明,芹菜素与阿昔洛韦合用能增加SD大鼠血浆中阿昔洛韦的浓度,能使大鼠体内阿昔洛韦的AUC(o-t)从10230.36±212.38 mg/L*min增加至21109.58±2867.39mg/L*min(p0.0001),平均驻留时间(MRT)从65.38±10.73min增加至109.06±14.64min(p0.001),半衰期从98.63±29.00min延长至125.86±45.05min。MTT实验中,芹菜素与阿德福韦合用后,能以剂量依赖性的方式降低阿德福韦导致的细胞毒性,50pM芹菜素能够使200μM阿德福韦作用下的细胞活力从50.6%增加至112.62%。结论:本实验成功构建了能用于筛选hOAT1的有效抑制剂的稳定表达hOAT1的细胞模型。该细胞模型能用于基于OAT1的药物-药物相互研究。筛选的中药单体中,芹菜素对OAT1的抑制作用最强,且能与抗病毒药阿昔洛韦或阿德福韦发生相互作用,提示芹菜素能改变阿昔洛韦的药代动力学特征,在临床上需调整后者的剂量以避免毒副作用。此外,芹菜素可与由OAT1介导产生毒性的药物合用,发挥降低毒性的作用,即作为一种肾脏保护剂,扩展了芹菜素的应用范围。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96

【参考文献】