α-硫辛酸对小鼠卵巢颗粒细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

发布时间：2018-02-15 00:21

  本文关键词： α-硫辛酸 氧化应激 细胞凋亡 卵巢颗粒细胞 小鼠　出处：《西安交通大学学报(医学版)》2016年01期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的探讨α-硫辛酸对小鼠颗粒细胞培养过程中抗氧化水平和抗凋亡水平的影响。方法收集经PMSG处理的小鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养24h后,添加终浓度为100μmol/L的α-硫辛酸继续培养24h,测定氧化水平SOD、MDA和GSH-Px参数,评价抗氧化能力,采用Trizol法提取各组细胞的RNA,进行RT-PCR法检测α-硫辛酸对caspase-3和caspase-9基因的表达情况的影响,同时利用细胞免疫荧光和ELISA法检测caspase-3和caspase-9蛋白表达,并分析α-硫辛酸降低细胞凋亡的作用。结果分离培养的小鼠卵巢颗粒细胞α-硫辛酸添加后,SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低(P0.05);经过RT-PCR扩增技术获得长度为180bp的特异性caspase-3产物,获得长度为152bp的特异性caspase-9产物,α-硫辛酸添加可显著性降低caspase-3和caspase-9mRNA的表达(P0.05);免疫荧光细胞化学染色显示颗粒细胞caspase-3和caspase-9蛋白阳性染色定位于细胞胞质,分别呈现绿色荧光和红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;ELISA结果显示α-硫辛酸添加后caspase-3和caspase-9酶活性显著下调(P0.05)。结论小鼠颗粒细胞培养过程中添加α-硫辛酸可明显改变细胞抗氧化能力,对卵巢颗粒细胞培养过程中的氧化应激诱导的细胞凋亡起到一定的保护作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of 伪 -lipoic acid on the levels of antioxidation and anti-apoptosis in mouse granulosa cells cultured in vitro. Methods the granulosa cells of mouse ovary treated with PMSG were collected and cultured for 24 hours. 伪 -lipoic acid with final concentration of 100 渭 mol/L was added to culture for 24 h, the oxidation level of SDD and GSH-Px parameters were measured, the antioxidant ability was evaluated, the Trizol method was used to extract the RNAs of each group, and the effect of 伪 -lipoic acid on the expression of caspase-3 and caspase-9 genes was detected by RT-PCR assay. At the same time, the expression of caspase-3 and caspase-9 protein was detected by cellular immunofluorescence and ELISA assay. The effect of 伪 -lipoic acid on cell apoptosis was analyzed. Results the activity of GSH-Px and activity of GSH-Px were increased after addition of 伪 -lipoic acid, and the specific caspase-3 product of 180 BP was obtained by RT-PCR amplification. A 152bp specific caspase-9 product was obtained. The addition of 伪 -lipoic acid significantly decreased the expression of caspase-3 and caspase-9mRNA, and immunofluorescence cytochemical staining showed that the positive staining of caspase-3 and caspase-9 protein was localized in the cytoplasm of granulosa cells. The results showed that the activity of caspase-3 and caspase-9 decreased significantly after addition of 伪 -lipoic acid. Conclusion the addition of 伪 -lipoic acid in granulosa cells can significantly change the antioxidant ability of mouse granulosa cells. It can protect ovarian granulosa cells from apoptosis induced by oxidative stress.
【作者单位】： 宁夏医科大学/生育力保持教育部重点实验室/宁夏回族自治区生殖与遗传重点实验室/宁夏医科大学总医院生殖医学中心/人体解剖与组织胚胎学系;
【基金】：宁夏自然科学基金资助项目(No.NZ11128)~~
【分类号】：R965

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