青蒿琥酯对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原沉积的影响

发布时间：2018-02-24 05:37

  本文关键词： 增生性瘢痕 成纤维细胞 青蒿琥酯 细胞增殖 胶原 果蝇抗皮肤生长因子原体3 结缔组织生长因子 基质金属蛋白酶1　出处：《广西医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的和意义：将青蒿琥酯作用于体外培养的人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs），检测细胞的增殖变化及其胶原沉积状况，同时检测胶原合成及降解相关因子的表达，为青蒿琥酯抑制皮肤瘢痕增生提供依据。 方法：1、采集手术切除的患者皮肤增生性瘢痕组织标本，组织块法原代培养分离获得HSFBs。形态学观察结合免疫组化抗波形蛋白及角蛋白染色对所获得的细胞进行鉴定。 2、实验共分为5组，分别为空白对照组，青蒿琥酯（75μM）组，青蒿琥酯（150μM）组，青蒿琥酯（300μM）组及青蒿琥酯（600μM）组。 3、青蒿琥酯作用于HSFBs24小时后，通过倒置显微镜观察HSFBs的形态变化，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测青蒿琥酯作用后对HSFBs增殖的影响。 4、用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）法检测青蒿琥酯对HSFBs产生Ⅰ型前胶原α2链（proCOL1A2），Ⅲ型前胶原α1链（proCOL3A1），果蝇抗皮肤生长因子原体3（Smad3）、结缔组织生长因子（CTGF）及基质金属蛋白酶1（MMP-1）基因转录的影响。 5、运用免疫印迹法（WB）检测青蒿琥酯作用后HSFBs的Ⅰ、Ⅲ型胶原及Smad3及CTGF蛋白的表达情况。双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中的MMP-1的蛋白含量。 结果：1、所培养细胞呈长梭形，免疫组化抗波形蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性。 2、MTT检测显示，和对照组相比，各干预组HSFBs的OD值明显降低，差异有统计学意义（P0.01）。倒置显微镜下观察发现青蒿琥酯作用后，，HSFBs的细胞形态亦发生较明显改变。 3、检测发现各浓度青蒿琥酯作用24小时后，proCOL1A2及proCOL3A1mRNA表达均明显下调，与空白对照组比较有统计学差异（P0.01），并伴有Smad3及CTGF mRNA表达下调，与空白对照组比较有统计学差异（P0.01）；而MMP-1的mRNA表达则不同程度的上调。 4、青蒿琥酯作用24小时后，免疫印迹法检测发现HSFBs的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原蛋白的表达明显降低，与空白对照组比较有统计学差异（P0.01）；伴有Smad3及CTGF蛋白表达不同程度的下调。 5、ELISA法检测发现青蒿琥酯作用后细胞培养上清液中的MMP-1的含量不同程度的上升。 结论：1、青蒿琥酯能抑制体外培养的HSFBs的细胞增殖，并在一定范围内具有浓度依赖性。 2、青蒿琥酯作用于HSFBs后，可通过下调其Smad3和CTGF的表达，减少胶原的转录及合成；同时上调其MMP-1的分泌，加速胶原的降解，从而减少胶原沉积，这可能是青蒿琥酯抑制皮肤瘢痕纤维增生的机制之一。
[Abstract]:Aim and significance: artesunate was applied to human skin hypertrophic scar fibroblasts in vitro to detect the proliferation and deposition of collagen and the expression of factors related to collagen synthesis and degradation. It provides evidence for artesunate to inhibit scar proliferation of skin. Methods HSFBswere collected from the skin hypertrophic scar tissues of patients with surgical excision. HSFBswere isolated by tissue mass method. The cells were identified by morphological observation combined with immunohistochemical staining of vimentin and keratin. 2. The experiment was divided into 5 groups: blank control group, artesunate 75 渭 M group, artesunate 150 渭 M) group, artesunate 300 渭 M) group and artesunate 600 渭 M) group. 3. The morphological changes of HSFBs were observed by inverted microscope, and the effects of artesunate on the proliferation of HSFBs were detected by tetramethyl azolium blue (MTT) method after treated with artesunate for an hour. 4. Fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (FQ-RT-PCR) was used to detect artesunate producing procollagen 伪 2 chain proCOL1A2, procollagen type 鈪

本文编号：1529073