索拉非尼结构类似物1122-37的抗癌活性及机制研究

发布时间：2018-02-25 07:09

  本文关键词： 受体酪氨酸激酶抑制剂 索拉非尼 吲唑双芳基脲衍生物 抗肿瘤　出处：《山东大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：受体酪氨酸激酶抑制剂是一类具有分子靶向作用的小分子化疗药物,它的出现填补了传统化疗药物缺乏肿瘤细胞针对性的空白,并在临床应用中取得了很好的疗效。索拉非尼是受体酪氨酸激酶抑制剂的代表药物,其口服有效且对大部分的激酶都有很强的抑制作用,显示了其很好的抗癌活性,广泛用于肝癌、肾细胞肾癌和非小细胞肺癌的化疗。但是,索拉非尼也有不足之处,特别是肝脏毒性、肾毒性和心脏循环系统的毒副作用,严重影响了索拉非尼的应用。对索拉非尼进行结构改造以期获得更高疗效、更好临床使用效果的化合物成为研究热点。1122-37是吲唑基取代的双芳基脲类衍生物,前期研究结果表明其对很多肿瘤细胞株抑制作用优于索拉非尼,本研究采用多种体外实验方法对1122-37抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡及抑制新生血管形成等方面作用进行了研究。 方法：本课题利用MTT比色法评价1122-37对人肝癌细胞株PLC/PRF/5的增殖抑制作用；利用Hoechst染色法和PI/Annexin V双染法评价1122-37对PLC/PRF/5的凋亡诱导作用；利用碘化丙锭染色法评价1122-37对PLC/PRF/5的周期阻滞作用；Western Blotting法对1122-37上述作用的可能机制进行分子生物学层面的探讨；利用基质胶微管形成试验和Western Blotting法对1122-37抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖和微血管形成的作用及其分子生物学机制进行探究。 结果：MTT法评价1122-37的抗增殖作用结果显示,1122-37(0.2～25gM)能明显抑制PLC/PRF/5的增殖且呈现剂量依赖性,1122-37对PLC/PRF/5细胞72h作用IC50值为4.34μM,而索拉非尼为11.39μM,在抑制PLC/PRF/5增殖方面1122-37优于索拉非尼。Hoechst33258染色、FITC-Annexin V/PI双染法及western blotting评价1122-37的凋亡诱导作用显示,1122-37(1.25～5μM)处理后的PLC/PRF/5出现不同程度的细胞核深染,部分细胞出现染色质固缩或聚至核膜周边呈月牙形,整体呈现剂量依赖性；1.25,2.5和5μM1122-37处理24h组PLC/PRF/5细胞凋亡率分别为16.08%,24.73%和29.26%；1122-37可能通过下调Mcl-1的表达激活caspase凋亡途径发挥作用。碘化丙啶染色法及western blotting评价1122-37的细胞周期组织作用显示,1.25,2.5和5μM1122-37处理24h组细胞G1期的百分比分别为78.67%,80.98%和83.03%；1122-37可能通过下调G1期关键蛋白cyclin D1的表达发挥作用。Western blotting对细胞内受体及相关激酶、通路的检测显示1122-37能够通过抑制受体酪氨酸激酶c-Kit的磷酸化抑制其下游的Ras/Raf/MEK/ERK通路和PI3K/Akt通路,还能够抑制Wnt/β-Catenin通路的活性从而抑制了包括Mcl-1、cyclin D1在内的一些凋亡抑制、促增殖因子,如survin、 PCNA和c-MyC。1122-37作用于HUVEC细胞的MTT试验、微管形成试验及western blotting评价1122-37的抗血管生成作用结果显示,1122-37(5-25μM)可显著抑制HUVEC细胞的增殖；1.25,2.5,5gM1122-37作用18h管腔结构随1122-37浓度升高依次减少,平均每视野有复杂分支的点数分别为16,15,9个；1122-37可能通过下调血管内皮生长因子VEGF的表达及其受体VEGFR-2的磷酸化水平发挥作用。 结论：1122-37显著抑制PLC/PRF/5细胞增殖,主要通过对受体酪氨酸激酶c-Kit及其下游通路的抑制和阻滞Wnt/β-Catenin通路使细胞内的抗凋亡因素受到抑制；1122-37能够抑制HUVEC细胞的增殖和血管生成,与抑制VEGF表达和VEGFR-2磷酸化作用有关；1122-37的作用明显高于索拉非尼。
[Abstract]:Background : Receptor tyrosine kinase inhibitor is a class of small molecule chemotherapeutic drugs with molecular targeting effect . It has been used to fill the blank of tumor cells in traditional chemotherapeutic drugs . Methods : The proliferation inhibitory effect of 1122 - 37 on PLC / PRF / 5 was evaluated by MTT colorimetric method . The effects of 1122 - 37 on the apoptosis of PLC / PRF / 5 were evaluated by MTT colorimetric method . The possible mechanism of 1122 - 37 on PLC / PRF / 5 was evaluated by propidium iodide staining . Western Blotting method was used to evaluate the effects of 1122 - 37 on the proliferation of human umbilical vein endothelial cells ( HUVEC ) and the mechanism of molecular biology . Results : The results of MTT assay showed that 1122 - 37 ( 0.2 ~ 25gM ) inhibited the proliferation of the PLC / PRF / 5 cells and showed dose - dependent effect . CONCLUSION : 1122 - 37 significantly inhibited the proliferation of PLC / PRF / 5 cells . The inhibition of the receptor tyrosine kinase c - Kit and its downstream pathway and the blocking of Wnt / 尾 - Cavities pathway inhibited the proliferation of HUVEC cells and angiogenesis , which was associated with the inhibition of VEGF expression and the phosphorylation of VEGFR - 2 ; the effect of 1122 - 37 was significantly higher than that of sordid .

【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R96

【共引文献】

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本文编号：1533462