重组人促红素理化对照品的质量评价

发布时间：2018-03-19 09:46

  本文选题：重组人促红素　切入点：理化对照品　出处：《药物分析杂志》2017年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱。色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为水(A)-乙腈(B)-1%甲酸水溶液(C),梯度洗脱(0~60 min,1%B→60%B,10%C;60~61 min,60%B→90%B,10%C;61~75 min,90%B→1%B,10%C),流速0.2 m L·min~(-1),柱温为40℃,样品保存温度为10℃,上样量5μL;质谱条件:MSE模式采集数据,毛细管电压3 000 V,Cone电压40 V,去溶剂气体温度350℃,源温120℃,去溶剂气体流速800 L·h-1,扫描范围m/z 50~2 000。确证一级结构,二硫键链接方式及糖基化位点;绘制N糖图谱,分析寡糖结构;用毛细管区带电泳分析异构体。采用压力进样3.45 k Pa;进样时间10 s,分离电压15.4 k V,分离时间80 min,检测波长214 nm。其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行。结果:建立的方法适合促红素理化对照品的检测,各样品的氨基酸序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致。等电聚焦结果为5~8条电荷异构体条带,不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异,蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准。结论:建立了理化对照品的质量标准,不同企业的理化对照品质量总体稳定一致,但糖基化水平存在一定差异,分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性,糖基化,异构体分布、电荷异质性等方面的差异。
[Abstract]:Objective: to establish the quality standard of physicochemical reference substance of recombinant human erythropoietin and evaluate the quality of physicochemical reference substance of erythropoietin in 8 enterprises. Methods: the biological activity in vivo was determined by reticulocyte counting method in normal mice. Mapping of quality peptides using LC-MS. Chromatographic conditions: BEH300 C4 column: 2.1 mm 脳 50 mm ~ 3.5 渭 m ~ (-1) 渭 m ~ (-1) C ~ (-1) C _ (1) C _ (1) C _ (C), gradient elution: 0 ~ 60 min ~ (-1) C ~ (2 +) C _ (1) C _ (1) C _ (1) C _ (2) C _ 4 C _ 4 column. 鈫，

本文编号：1633722