TrxR抑制剂AA1的抗肝癌活性研究

发布时间：2018-03-30 14:40

本文选题：肝癌　切入点：AA1　出处：《山东大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究目的随着社会的发展,引发肝病的因素也是错综复杂,其中包括氧化还原的失衡。硫氧还蛋白系统是生物体普遍存在的调控氧化还原平衡系统之一,由硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)、硫氧还蛋白还原酶(Thioredoxin reductase,TrxR)和烟酰腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)组成。TrxR主要是通过作用于其底物分子Trx来维持细胞的氧化还原平衡以及调控氧化还原所介导的信号转导,进而影响细胞的生理过程。Trx系统参与多种疾病的发生发展,在肿瘤中的研究众多。近年研究证实,TrxR在多种原发性肿瘤中高表达,TrxR的高表达以及高活性与肿瘤的发展密切相关。目前观点认为,TrxR在促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡以及诱导耐药性等事件中有着推动作用,此过程往往伴随着MAPK、NF-κB等信号通路以及肿瘤免疫微环境的变化。因此,以TrxR为靶点的抗肿瘤药物引起了研究者的热切关注,并有望发展为治疗肿瘤的新靶点。化疗药物联用将是今后肿瘤治疗的一大趋势,而Trx抑制剂势必会扮演重要的角色。目前临床上,某些TrxR抑制剂对不同肿瘤细胞的敏感性不同,这可能与患者体内的TrxR水平有关。然而,如何提高药物对肿瘤细胞TrxR的选择性和特异性,减少副作用及克服耐药性等均是非常值得关注的问题。所以阐明肝癌发生的分子机制,揭示肝癌发生过程中TrxR涉及的信号网络,寻找、明确新的诊疗方法仍然任重道远。基于上述现象,我们通过在体外体内展开了以下两方面的研究:一方面研究了 AA1作为TrxR抑制剂对肝癌进程的直接影响,包括增殖、凋亡、线粒体膜电位的影响以及相关的相关信号通路,发现了 AA1可以抑制肝癌的增殖、促进其凋亡及抑制自噬等现象,为临床TrxR抑制剂的使用提供了更为细致的理论依据。另一方面,AA1可以通过影响肿瘤免疫微环境而影响肿瘤发展进程,首次阐明TrxR抑制剂在免疫学方面的生物学意义,为临床用药及TrxR的进一步研究提供了一定的指导。研究方法1.采用DNTB法检测不同肿瘤细胞系基础TrxR的活性情况。2.采用MTT法检测AA1、化合物24对肝癌细胞增殖能力的影响。3.采用PI单染、Annexin-V/PI双染法分别检测AA1、化合物24对人和鼠肝癌细胞系周期、凋亡的影响。4.免疫荧光探针检测人和鼠肝癌细胞系ROS产生情况、线粒体受膜电位及自噬小体形成的情况。5.采用western blot实验检测AA1作用后MAPK信号通路p-ERK、p-JNK、p-p38的蛋白水平变化;自噬相关信号通路p-mTOR、p62的蛋白水平变化。6.裸鼠皮下荷瘤HepG2细胞,检测AA1体内抗HCC效果。7.Transwell体外检测AA1对脾淋巴细胞的募集情况。8.C57小鼠荷Hepa1-6细胞检测AA1的抗肿瘤效果。9.流式细胞术检测小鼠肝、脾及肿瘤浸润淋巴细胞的分群、活化情况。研究结果1.TrxR在HCC细胞系中呈现高表达;2.AA1能显著抑制肝癌细胞的增殖;3.AA1通过诱导凋亡作用抑制肝癌细胞增殖;4.AA1通过靶向TrxR由ROS介导凋亡作用;5.AA1诱导肝癌细胞线粒体膜电位下降;6.AA1使肝癌细胞自噬能力降低,但并不依赖于ROS;7.AA1促进肿瘤免疫微环境中CD8+T的募集;8.AA1能够改善体内肿瘤免疫微环境而抑制肿瘤进程;9.化合物24可以抑制HCC增殖;10.化合物24通过诱导凋亡抑制HCC增殖。结论及意义1.本研究明确了 AA1通过诱导凋亡对HCC的生长产生抑制,并且这种作用由ROS所介导。2.进一步发现,AA1会诱导HCC线粒体膜电位下降;当使用了 NAC后,损伤得到缓解,提示为ROS所介导;自噬作用受到抑制,但并非ROS介导,可能为直接作用,还需要进一步探究。3.初次提出TrxR抑制剂与免疫系统之间的关系。发现TrxR抑制剂可以改变肿瘤免疫微环境中免疫细胞的组成,影响肿瘤发展进程。4.以上研究或许可以为临床肿瘤用药及进一步的TrxR抑制剂的研究提供新的思路。
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【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R96

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